產(chǎn)品名稱：鮑球狀病毒PCR定量試劑盒
英文名稱：Abalone Spherical VirusPCR
產(chǎn)品分類：PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50次
普通PCR反應(yīng)流程：

產(chǎn)品及特點(diǎn)
1.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
2.熒光定量 PCR 檢測(cè)，反應(yīng)特異性強(qiáng)。
3.提供陽(yáng)性對(duì)照，便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4.PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳，本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 改進(jìn)了DOP-PCR的循環(huán)參數(shù)。
2. 優(yōu)化的引物濃度，使自連序列和非模板相關(guān)序列的合成。
3. 可使用各種來源的樣品，包括全血，干血，發(fā)根，口腔粘膜刮液培養(yǎng)細(xì)胞，真菌和病毒等。
4. 操作簡(jiǎn)便快捷，恒溫（30℃）反應(yīng)，無須PCR儀即可實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增。
5. 產(chǎn)物可用于多種后續(xù)試驗(yàn)，包括多重PCR、長(zhǎng)片斷PCR、定量PCR、克隆、文庫(kù)構(gòu)建、單倍型分析、測(cè)序、基因芯片分析、各種遺傳分析（片段差異，微衛(wèi)星差異，SNP，STR）等。
【儲(chǔ)存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個(gè)月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可*保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
u 運(yùn)輸：采用或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【自備試劑】:
*，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
【使用方法】:
注：所有試劑使用前需*解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等，具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說明書；陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）
取N個(gè)（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

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