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環氧合酶(COX,又稱前列腺素H合酶或PGHS)是一種具有COX和過氧化物酶活性的雙功能酶。環氧合酶組分將花生四烯酸轉化為氫過氧化物內過氧化物(PGG2),過氧化物酶組分將內過氧化物還原為相應的醇(PGH2),即PGs、血栓素和前列環素的前體。
現在已經確定COX有兩種不同的亞型。COX-1在多種細胞類型中組成性表達,并參與正常細胞內穩態。多種刺激物,如佛波酯、脂多糖和細胞因子,導致第二種COX亞型COX的誘導表達.在急性炎癥條件下,COX-2負責PGs的生物合成。這種誘導型COX-2被認為是非甾體抗炎藥抗炎活性的靶酶。
艾美捷COX熒光抑制劑篩選試驗為篩選綿羊COX-1和人類重組COX-2的同工酶特異性抑制劑提供了一種方便的基于熒光的方法。該分析利用了柯薩病毒的過氧化物酶成分。PGG2和ADHP(10-乙酰基-3,7-二羥基苯惡嗪)之間的反應產生高熒光化合物resorufin。
使用板塊上的井沒有特定的模式。然而,有需要將三個孔指丨定為非酶或背景孔。這些孔的熒光須從COX孔中測得的熒光中減去。建議對每個COX樣品進行一式三份的分析。
艾美捷COX熒光抑制劑篩選試劑盒實驗注意事項:
•所有孔中的分析最終體積為200µl。
•在分析中使用稀釋的分析緩沖液。
•所有試劑(酶除外)須平衡至室溫在開始化驗之前。
•無需一次性使用板上的所有孔。
•不必同時使用這兩種酶。可以使用COX-1或COX-2進行研究。
•建議化驗樣品一式三份,但用戶可自行決定。
•可對30個抑制劑樣品進行一式三份或四十六份的分析。
•在室溫下進行分析。
•用530-540 nm的激發波長和585-595 nm的發射波長監測熒光。
•在靠近熒光計的位置啟動花生四烯酸反應,因為有必要在反應開始兩分鐘后讀取平板。
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