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Worthington核酸酶、微球菌相關研究及測定方案

時間:2022-7-25閱讀:33
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艾美捷Worthington核酸酶、微球菌背景:

微球菌核酸酶催化 DNA 和 RNA 的切割以產生 3'-核苷酸。它具有外切和內切 5'-磷酸二酯酶活性。該酶在富含腺苷酸或尿苷酸和脫氧腺苷酸或胸苷酸的位點催化 RNA 和 DNA 的優先內切水解。該酶的分子量為 16,807 道爾頓,并且依賴于鈣。最佳 pH 值為 9.2,但會根據存在的離子鈣濃度而變化。

 

單位定義:一個單位對應于在 37°CpH 8.0260 nm 處光密度變化 1.0,使用 DNA 作為底物。

 

艾美捷Worthington核酸酶、微球菌相關研究

白蛋白,無核酸酶 (BSANF)

脫氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

ERASE RNase A/T1 Blend (RCT)

組蛋白 (H, NHL)


核酸酶,S1 ( SINUC/SINUCL)

核酸、DNA、大腸桿菌、λ/片段、RNA

磷酸酶、堿性 (CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC)

磷酸二酯酶 I (VPH)

磷酸二酯酶 II (SPH)

蛋白酶 K (PROK/PROKS)

反向轉錄酶,重組 HIV (RTHIV)

核糖核酸酶 A (R/RAF/RASE/RS/RPDF)

核糖核酸酶 T1,無動物源 (RT1S)

 

艾美捷Worthington核酸酶、微球菌測定:

方法:基本上是 Heins等人所描述的。(1966) 基于核酸酶消化 DNA 后酸溶性寡核苷酸的釋放。一個單位對應于在 37°C 和 pH 8.0 在指丨定條件下在 260 nm 處的 1.0 光密度變化。

 

試劑:

0.1 M 硼酸鈉,pH 8.8

0.01 M 氯化鈣

DNA2.5 mg/ml:將 25 mg Worthington 小牛胸腺 DNA 溶解在 10 ml 0.01 M NaCl 中制備。在室溫下靜置過夜,然后緩慢攪拌以產生溶液。

7% 高氯酸

0.1% 牛血清白蛋白

 

酶:

 1 mg/ml 溶解在試劑級水中。在 0.1% 白蛋白中稀釋至 0.001-0.002 mg/ml 用于測定。


方程

91.jpg


程序:

如下移液器進入 5 個編號的試管中的每一個:

0.1 M 硼酸鈉,pH 8.8 0.1 毫升

0.01 M CaCl 2 0.05 毫升

0.25% DNA 0.1 毫升

 

 37°C 水浴中孵育 6-7 分鐘以達到溫度平衡。在 0.001-0.0002 mg/ml 范圍內制備至少四種不同的酶稀釋液。每隔一段時間,將 0.1 ml 適當稀釋液移入相應的試管中,并在水浴中更換。向作為空白的第五個添加 0.1 ml 0.1% 白蛋白。孵育 30 分鐘。通過添加 0.5 ml 7% 高氯酸以定時間隔停止反應。將試管置于冰浴中 10 分鐘,然后加入 2.7 ml 試劑級水。在臨床離心機上以最高速度離心 15 分鐘。抽出上清液并讀取 A 260與空白對照。

 

注意:為獲得最佳結果,應稀釋樣品以使最終 A 260介于 0.2-0.9 之間。

 

Worthington主要研究覆蓋生物技術和生命科學研究,診斷,生物制藥和生物加工應用的高質量純化酶,蛋白質,核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優質的產品與服務。


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