蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)中二抗的選擇是非常重要的。那么接下來就一起來看Jackson ImmunoResearch公司選擇二抗的相關(guān)注意事項(xiàng)吧~

宿主物種的相容性

如果使用多種二抗，例如探測兩種一抗，請選擇相同的宿主物種以盡量減少任何交叉反應(yīng)。如果這不可能，則選擇與實(shí)驗(yàn)中其他二抗的宿主物種交叉吸附的二抗。

交叉反應(yīng)物種

雖然在蛋白質(zhì)印跡中不常見，但某些應(yīng)用需要針對其他物種吸附的二抗，以盡量減少對內(nèi)源性免疫球蛋白的識(shí)別（例如用抗大鼠一抗探測小鼠組織裂解物）

或其他一抗。因此，請選擇可用于預(yù)期應(yīng)用的具有適當(dāng)交叉吸附的二抗宿主。

經(jīng)驗(yàn)或偏好

宿主物種的選擇通常歸結(jié)為個(gè)人偏好或先前的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。在不同宿主物種中產(chǎn)生的二抗之間似乎幾乎沒有質(zhì)量差異，只是某些物種更適合大規(guī)模生產(chǎn)。

特異性

選擇具有正確特異性的二抗很重要。盡管全 IgG (H+L) 適用于大多數(shù)免疫測定，但其他專業(yè)特異性允許設(shè)計(jì)更復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)，以消除不必要檢測的潛在干擾。

抗 IgG (H+L)

Jackson ImmunoResearch公司抗 IgG (H+L)與 IgG 分子的重鏈和輕鏈都發(fā)生反應(yīng)，即與 IgG 的 Fc 和 F(ab')2 / Fab 區(qū)發(fā)生反應(yīng)（圖 1）。抗 IgG (H+L) 抗體也與其他免疫球蛋白類別（IgM、IgA、IgD、IgE）和亞類發(fā)生反應(yīng)，因?yàn)樗鼈兌脊蚕硐嗤妮p鏈（kappa 或 lambda）。

抗 IgG (H+L) 抗體比抗片段特異性抗體具有更廣泛的表位識(shí)別。它們也被建議用于所有一般的免疫檢測程序。

同種型特異性：Fc 特異性抗體

大多數(shù)一抗是 IgG 同種型。有時(shí)根據(jù)抗體的產(chǎn)生方式使用其他類別，例如 IgM 和 IgA。對免疫球蛋白的 Fc 域特異的二抗將特異于該特定 Fc 域的同種型。

因此，Fcγ特異性抗體將對IgG特異性，而對Fcα特異性的抗體將特異性檢測IgA，而Fcμ將檢測IgM。

還提供泛特異性抗體，可用于檢測兩種或多種同種型。根據(jù)您的應(yīng)用程序，這可能很有用。選擇對一抗同種型具有特異性的二抗。

子類特異性

由于同源 Fcγ 結(jié)構(gòu)域的相似性，IgG 特異性抗體將檢測所有 γ 同種型免疫球蛋白。根據(jù)用于生成一抗的小鼠品系，免疫球蛋白的亞類可能是 5 個(gè)中的 1 個(gè)。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，您可能有兩種不同亞類的小鼠抗體靶向兩種蛋白質(zhì)。要區(qū)分兩種一抗，您需要亞類特異性抗體。

小鼠表達(dá)構(gòu)成其 IgG 同種型的五種可用 IgG 亞類中的四種。它們通常會(huì)產(chǎn)生 IgG1、IgG2b 和 IgG3，根據(jù)它們的菌株，它們還會(huì)表達(dá) IgG2a 或 IgG2c。

Jackson ImmunoResearch 抗小鼠 IgG 亞類特異性抗體對五種單獨(dú)的小鼠 IgG 亞類具有特異性。這些高度特異性的抗體旨在在多重實(shí)驗(yàn)中區(qū)分兩種或多種不同的小鼠 IgG 亞類或用于確定小鼠 IgG 亞類。它們已被人、牛和兔血清蛋白吸附，以J大限度地減少與組織免疫球蛋白、培養(yǎng)細(xì)胞上的粘附牛 IgG 和兔一抗的交叉反應(yīng)。亞類特異性抗體提供亞類之間的精細(xì)區(qū)分。

圖 1：IgG 和 F(ab')2 和 Fc 區(qū)的帶狀圖

圖 2. 斑點(diǎn)印跡顯示山羊抗小鼠 IgG亞類特異性抗體的特異性。

單獨(dú)的硝酸纖維素條（行）接受 100 ng “點(diǎn)"的小鼠 IgG 和每個(gè)亞類，然后用 PBST 中的 5% (w/v) BSA 封閉。在用 HRP 綴合的山羊抗小鼠亞類特異性抗體探測后，用 TMBM 底物顯色條帶。

陽性信號(hào)網(wǎng)格顯示每個(gè)亞類導(dǎo)向抗體的特異性。一些亞類在總 IgG 池中的代表性較差，因此信號(hào)較弱（總 IgG 與抗 IgG2c 和 -IgG3）。用于探測的 HRP 偶聯(lián)物是 115-035-205（抗小鼠 IgG1）、115-035-206（抗小鼠 IgG2a）、115-035-207（抗小鼠 IgG2b）、115-035-208（抗-小鼠 IgG2c) 和 115-035-209 (抗小鼠 IgG3)。

注意：

抗 IgG、Fcγ 片段特異性抗體與所有單克隆一抗的反應(yīng)不同。對于對四個(gè) IgG 亞類具有平衡反應(yīng)性的抗小鼠 IgG、Fcγ 片段特異性抗體，選擇山羊抗小鼠 IgG（亞類 1+2a+2b+3）、Fcγ 片段特異性（min X Hu、Bov、Rb Sr Prot ）。

此外，在單標(biāo)記實(shí)驗(yàn)或涉及一種小鼠單克隆抗體和來自其他物種的一抗的多重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中，對于小鼠單克隆抗體的一般檢測，亞類特異性抗體不是必需的。

Jackson公司專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)領(lǐng)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動(dòng)物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。