逆轉錄病毒基因轉移是一種有效地將穩定的、可遺傳的遺傳物質導入大腸桿菌的技術任何分裂細胞類型的基因組。不能復制的逆轉錄病毒通常通過將逆轉錄病毒載體轉染到包裝細胞系中。逆轉錄病毒根據用于進入宿主細胞的受體。親嗜性病毒可以識別僅在小鼠身上發現的受體和大鼠細胞。兼嗜性病毒識別廣泛的哺乳動物細胞上發現的受體類型。
小鼠白血病病毒(MMLV)為基礎的載體是基因中應用廣泛的逆轉錄病毒載體由于其能夠將其轉基因穩定整合到宿主染色體DNA中的能力較低免疫原性。通過覆蓋病毒進行滴定以確定病毒滴度的方法連續稀釋后上清液到靶細胞(例如NIH 3T3細胞)上被廣泛用于表示
感染性病毒濃度為每體積菌落數(即每毫升CFU)。然而,該集落形成測定是耗時的(7天或更長時間)。此外,滴度由由于用于相同滴定方法的條件不一致,不同的基團可能會有所不同,例如靶細胞類型,靶細胞數量,聚陽離子(例如聚凝胺)濃度,孵育溫度,和轉導的暴露時間。
Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™ 逆轉錄病毒定量試劑盒不涉及細胞感染;相反,它專門測量純化病毒或未純化病毒的病毒核酸含量上清液樣品(參見測試原理)。在未純化的病毒上清液的情況下,試劑盒是特別適用于在轉導步驟之前測定上清液滴度。該套件有檢測靈敏度極限為1.5 X 109病毒顆粒(VP)/mL,足以滿足中高滴度逆轉錄病毒樣本。整個過程大約需要60分鐘。每個試劑盒都提供足夠的試劑執行20次測試。QuickTiter™ 逆轉錄病毒定量試劑盒提供了一種快速定量的有效系統病毒上清液和純化病毒的逆轉錄病毒滴度。
Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™ 逆轉錄病毒定量試劑盒測定原理:
Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™ 逆轉錄病毒定量試劑盒套件組件:
1.QuickTiter™ 溶液A(部件號40020):一根試管–200µL。
2.快速滴定™ 逆轉錄病毒溶液B1(部件號312001):一根試管–800µL。
3.QuickTiter™ 逆轉錄病毒溶液B2(部件號312002):一根試管–800µL。
4.QuickTiter™ 溶液C(2X)(部件號40023):兩個管-每個1.5 mL
5.CyQuant®GR染料(400X)(部件號105101):一根試管–50µL。
6.QuickTiter™ 逆轉錄病毒RNA標準品(部件號312003):一個試管–500µL,含200
µg/mL retrovirus RNA Standard
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