細胞增殖的測量和監(jiān)測是任何實驗室中bi不可少的技術(shù)專注于基于細胞的研究。該技能還允許優(yōu)化細胞培養(yǎng)條件作為細胞因子，生長因子或激素活性的測定。更重要的是，細胞抑制丨毒理學測試中抗癌化合物的性質(zhì)，治療化學品在藥物中的功效篩選和細胞介導的細胞毒性都可以通過定量和監(jiān)測來評估細胞增殖。

細胞增殖特征包括細胞代謝活性和細胞膜完整性。一個測量代謝活性的方法是用四唑鹽如WST-1孵育細胞，通過代謝活性細胞裂解成有色甲product產(chǎn)物。同樣，綠色熒光染料Calcein-AM可以測量增殖活細胞中的細胞內(nèi)酯酶活性是細胞活力的另一個指標。

艾美捷MTT細胞增殖檢測試劑盒測定原理：

Cell Biolabs的CytoSelect™ MTT細胞增殖測定提供了比色形式測量和監(jiān)測細胞增殖。該試劑盒含有足夠的試劑用于評估在96孔板中進行960次測定或在24孔板中進行192次測定。細胞可以被鍍，然后用影響增殖的化合物或藥劑。然后用增殖試劑檢測細胞，在活細胞中由黃色四唑MTT轉(zhuǎn)化為紫色福爾馬贊形式細胞還原酶（圖1）。細胞增殖的增加伴隨著信號的增加，雖然細胞增殖（和信號）的減少可以表明化合物的毒性作用或次優(yōu)的培養(yǎng)條件。該測定原理是基本的，可應用于大多數(shù)真核生物細胞系，包括貼壁和非貼壁細胞以及某些組織。這種細胞增殖試劑可用于檢測細菌，酵母，真菌，原生動物以及培養(yǎng)的哺乳動物中的增殖

和魚細胞。

艾美捷MTT細胞增殖檢測試劑盒相關(guān)研究：

1.CBA-080:CytoSelect™ 24孔失巢凋亡測定

2.CBA-081:CytoSelect™ 96孔失巢凋亡測定

3.CBA-230：細胞衰老測定試劑盒（SA-b-gal染色）

4.CBA-231:96孔細胞衰老測定（SAβ-Gal活性）

5.CBA-232：定量細胞衰老測定（SAβ-Gal）

6.CBA-240：細胞活力和細胞毒性測定

7.CBA-251細胞選擇™ BrdU細胞增殖ELISA試劑盒

8.CBA-253細胞選擇™ WST-1細胞增殖測定試劑

套件組件

1.MTT細胞增殖測定試劑（部件號125201）：一瓶10mL MTT試劑。

2.洗滌劑溶液（部件號125202）：一瓶100毫升洗滌劑溶液

艾美捷MTT細胞增殖檢測試劑盒測定方案：

1.制備含有0.1-1.0 x 106的細胞懸液培養(yǎng)基中的細胞/ml。

2.將每孔100μL加入96孔細胞培養(yǎng)板或每孔500μL加入24孔細胞培養(yǎng)物中有或沒有待測化合物的板。細胞在37°C和5%培養(yǎng)24-96小時加濕培養(yǎng)箱中的二氧化碳。

3.加入10μlCytoSelect™ MTT細胞增殖測定試劑，如果使用96-孔板，或24孔板的每個孔50µL。

4.在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小時，直至可見紫色沉淀（細胞在光學顯微鏡下可以更精確地觀察到沉淀物）

5.在96孔板的每孔中加入100μL去污劑溶液，或在24孔板的每孔中加入500μL去污劑溶液盤子。

6.在室溫下孵育2小時至避光過夜。

注意：在井中與洗滌劑溶液長時間孵育可能導致沉淀或渾濁可以增加背景。如果觀察到沉淀，將板在37℃加熱10-20分鐘并攪拌溶解沉淀物。

7.使用540-570nm作為主波長讀取吸光度。

相關(guān)文獻：

1. Jacobsen MD, Weil M, Raff MC. (1996) J Cell Biol 133, 1041.

2. Papadopoulos NG, Dedoussis GV, Spanakos G, Gritzapis AD, Baxevanis CN, Papamichail M.

(1994) J Immunol Methods 177, 101.

3. Yamaori S, Ishii H, Chiba K, Yamamoto I, Watanabe K (2013) Toxicology 314, 251

4. Wang Y, Qu L, Gong L, Sun L, Gong R, Si J (2013) Cancer Biother Radiopharm. 28, 623