活性氧（ROS）和活性氮（RNS）是公-認的分子導致氧化應激的有害影響。與氧化應激的增加與幾種疾病狀態的發病機制有關。這個氧化應激在血管疾病、糖尿病、腎缺血、動脈粥樣硬化、肺疾病中的作用病理狀態、炎癥性疾病、癌癥以及衰老都已得到充分證實。自由的自由基和其他活性物質在體內不斷產生，對人體造成氧化損傷生物分子，這一過程受到多種抗氧化劑和修復系統的制約，如以及替換受損的核酸、蛋白質和脂質。衡量抗氧化療法和ROS/RNS活性對抑制或治療氧化應激至關重要誘導劑。

艾美捷體外活性氧/活性氮檢測試劑盒是一種用于測量總自由基含量的檢測試劑盒一個樣本。該分析使用專有的淬滅熒光探針，二氯二氫熒光素DiOxyQ（DCFH-DiOxyQ），是一種特定的ROS/RNS探針，基于與流行的2'，7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯。DCFH DiOxyQ探頭首先用

然后以高反應性DCFH形式穩定反應狀態下，ROS和RNS物質可以與DCFH反應，DCFH被迅速氧化成熒光2'，7'-二氯二氫熒光素（DCF）。熒光強度成比例與樣品內的總ROS/RNS水平相關。DCFH DiOxyQ探針可與氫氣反應過氧化物（H2O2）、過氧自由基（ROO）、一氧化氮（NO）和過氧亞硝酸根陰離子（ONO-). 這些自由基分子是ROS和RNS的代表，因此允許測量樣本中的總自由基群體。

該試劑盒也可以用于評估抗氧化劑對自由基的影響。該試劑盒的檢測靈敏度極限為10pMDCF和H2O2分別為40nM。每個試劑盒提供足夠的試劑，最多可進行96次分析，包括標準曲線和未知樣品。

艾美捷體外活性氧/活性氮檢測試劑盒組分：

1. Priming Reagent (Part No. 234701): One 250 µL tube of solution.

2. Stabilization Solution (10X) (Part No. 234702): One 1.5 mL tube of solution.

3. Catalyst (250X) (Part No. 234703): One 20 µL tube of solution.

4. DCF-DiOxyQ (Part No. 234704): One 50 µL amber tube of solution in methanol.

5. DCF Standard (Part No. 234202): One 100 µL amber tube of a 1 mM solution in DMSO.

6. Hydrogen Peroxide (Part No. 234102): One 100 µL amber tube of an 8.821 M solution.

艾美捷體外活性氧/活性氮檢測試劑盒檢測原理：

該試劑盒是一種用于測量游離ROS/RNS總量的體外測定試劑盒自由基活性。用催化劑將未知的ROS或RNS樣品或標準加入到井中這有助于加速氧化反應。短暫孵育后，制備的DCFH探針添加到所有孔中，并允許氧化反應進行。測量樣品對過氧化氫或DCF標準進行熒光測定。在96孔中進行測定可以在標準熒光板讀取器上讀取的熒光板格式。自由基通過與預定的DCF或氫進行比較來確定未知樣品中的含量過氧化物標準曲線。

相關研究：

1.STA-330：OxiSelect™ TBARS測定試劑盒（MDA定量）

2.STA-340：OxiSelect™ 超氧化物歧化酶活性測定

3.STA-341：OxiSelect™ 過氧化氫酶活性測定試劑盒

4.STA-342：OxiSelect™ 細胞內ROS測定試劑盒（綠色熒光）

相關文獻：

1. Bass DA, Parce JW, Dechatelet LR, Szejda P, Seeds MC, Thomas M. Flow cytometric studies of

oxidative product formation by neutrophils: A graded response to membrane stimulation. J

Immunol. 1983; 130:1910-1917.

2. Brandt R, Keston AS. Synthesis of diacetyldichlorofluorescin: A stable reagent for fluorometric

analysis. Anal Biochem. 1965; 11:6-9.

3. Keston AS, Brandt R. The fluorometric analysis of ultramicro quantities of hydrogen peroxide.

Anal Biochem.1965; 11:1-5.