Detroit R&D 生物靶標20-HETE-ELISA試劑盒（#20HG1）用于測定生物樣品中的20-HETE（也稱為20-OH-AA）水平。使用真實的20-HETE和一組脂肪酸來研究20-HETE ELISA的特異性，基于它們的結構，可以預期與20-HETE競爭結合20-HETE的抗體?？?0-HETE與14,15-和11,12-DHETs、PGE2沒有交叉反應，即使與結構極其相似的花生四烯酸（AA）、亞-油-酸和亞麻酸ELISA分析?？紤]到20-HETE和AA之間的唯1區別是氧分子底特律研發20-HETE ELISA是一個驚喜。

人類原發性和鹽敏感性高血壓與細胞色素P450的AA代謝差異有關（CYP）4A，具有AA-ω-羥化酶（20-HETE合成）活性。循環胰島素增加抑制20-肥胖高血壓受試者的HETE合成。 

最近，CYP4F2基因變異增加了尿20-HETE的分泌，被發現與中國人群患高血壓的風險。

該試劑盒可用于測定促滲后血清、血漿、細胞和組織中的20-HETE和純化。

保存：如果所有組件在使用前都儲存在適當的溫度下，該套件將獲得較佳的效果。項目應在收到此試劑盒后在指-定溫度下儲存。所有部件都儲存在-20°C以下，并且不應在必要時再次冷凍和解凍。

艾美捷Detroit R&D 生物靶標20-HETE-ELISA試劑盒樣品制備：

表達細胞色素P450（CYP）4A/4F的細胞中的20-HETE測量

1.使用含有最終濃度的約0.1 mM TPP（三苯基膦，0.03-0.05 mg/mL）。TPP是一種抗氧化劑，看起來像沉淀在樣品中，因為它不容易溶解。在使用包含TPP，旋轉樣品以從樣品溶液中分離沉淀的TPP。

2.用乙酸將整個均化的細胞酸化至約3-4的pH。測量使用標準pH紙。

3.用乙酸乙酯萃取。向均質細胞中加入等體積的乙酸乙酯渦流非常好。離心后，將上層有機相放入新鮮干凈的試管中。然后添加將另一等體積的乙酸乙酯加入均化細胞中，開始第二次提取。它是強烈建議進行三次提取。

4.從提取物中蒸發合并的乙酸乙酯，直到所有乙酸乙酯都在氬氣或氮氣下干燥氣體

5.皂化（如需要）

6.加入20μL N，N-二甲基甲酰胺（DMF），使干燥的殘留物溶解，用于重建。添加0.5 mL 1x樣品稀釋緩沖液（試劑盒中提供）制成溶液。在每個孔中加載100μL，以三份的形式在ELISA板上。（注意：我們建議在嘗試將結果擬合到標準曲線。例如，用50μL的剩余樣品加上3個孔50μL的1x樣品稀釋緩沖液，以及3個孔，其中10μL的其余樣品加上90μL的1x

樣品稀釋緩沖液。）

7.對20-HETE進行ELISA（根據制造商的說明）。

組織中的20-HETE測量：

1.將1g組織、4mL H2O和0.01mg TPP均勻化。

2.通過向每個勻漿中加入8μL乙酸來酸化勻漿。

3.用等量的乙酸乙酯提取，徹-底渦旋，向下旋轉，收集有機物階段再重復兩次提取，將所有有機相合并。

4.用氬氣或氮氣干燥有機相。

5.皂化（如果需要）（參見細胞中的20-HETE測量）

6.用N，N-二甲基甲酰胺（DMF）溶解來自上述步驟#4的干燥殘留物。（添加約20μL的DMF以重新構成干燥的殘留物。）

7.用1x樣品稀釋緩沖液進一步稀釋：加入約0.5 mL 1x樣品稀釋劑緩沖并在室溫下以10000rpm離心5分鐘。上清液將用于ELISA。

8. 對20-HETE進行ELISA（根據制造商的說明）

血漿或血清中20-HETE的測量以下是使用1.0mL液體的起始體積測量血漿或血清中20-HETE的方案。啟動也可以使用低于1.0mL的體積（例如，用于小鼠研究），通過制作適當的對所有體積和稀釋度進行比例調整。

Detroit R&D專注于心血管疾病、癌癥的研究，診斷和治療領域。涉及環境健康科學、高血壓、乳腺癌和前列腺癌相關研究領域。艾美捷科技是Detroit R&D的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。