DNA損傷分析試劑盒,用于在體內和體外測量8.8 kb線粒體DNA的損傷,通過QPCR分析,對復制的DNA進行實時PCR定量:
艾美捷Detroit R&D DNA損傷分析試劑盒#DD2H、#DD2M、#DD2R 包含DNA聚合酶、QPCR引物和dNTPs,real-time PCR的引物,以及用于real-time PCR定量的8.8kb real-time PCR標準品(不包括SYBR Green master mix for real-time PCR)。重復分析20個樣品(45個反應)。
整套試劑盒可用于人、大鼠或小鼠的血液、細胞或組織。由于缺失和鏈斷裂造成的DNA損傷可以用此試劑盒檢測,使用微板格式的DNA分離技術,該試劑盒可以很容易地用于高通量格式。在這方面,Detroit R&D研發分析是一個很有前途的工具,因為快速,操作簡單,只需要少量的測試物質。
DNA損傷分析試劑盒為基礎研究和工業應用提供了強大的工具。這種創新的方法是基于在一個長(8.2-8.8 kb)的線粒體DNA片段上進行30個周期的定量PCR,然后使用實時PCR進行定量。
左:實時PCR標準品擴增圖;右:實時PCR分析8.8kb線粒體DNA的標準曲線
候選藥物通常被生物轉化為有活性的毒性代謝物,通過COX-2過氧化物酶活性破壞DNA。Comet和OxyDNA檢測分別檢測斷裂DNA和氧化DNA。然而,候選藥物形成的數千種不同的DNAs,無法用這種方法檢測到。Detroit R&D開發了一種LQPCR檢測方法,用于檢測數千種不同候選藥物引起的DNA損傷修復缺陷,著色性干皮病A組(XPA)人成纖維細胞系致敏DNA損傷發生的候選藥物。表達COX-2的XPA細胞具有較強的COX-2催化活性。
LQPCR DNA損傷檢測的應用實例:
用一種已知的COX-2激活的DNA損傷劑benzo(a)pyrene-7,8-dihydrodiol (BPD),COX-2過氧化物酶活性的底物- tert-butyl hydroperoxide (t-BOOH)處理表達COX-2的XPA細胞。采用LQPCR分析DNA損傷。如上圖柱狀圖所示,COX-2依賴性DNA損傷在BPD治療后顯著增加。
除了細胞系統外,LQPCR DNA損傷測定還可用于新鮮或冷凍的組織或血液標本。因此,這種LQPCR DNA損傷試驗不僅可以用于篩選細胞內的候選藥物,也可以用于篩選體內的候選藥物。
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