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植物可溶性蛋白質酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
閱讀：83 發布時間：2020-4-8植物可溶性蛋白質（s-protein）酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定植物組織、細胞及相
關液體樣本中可溶性蛋白質（s
-
protein）的含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物可溶性蛋白質（s
-
protein）水平。用純化
的植物可溶性蛋白質（s
-
protein）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中
依次加入植物可溶性蛋白質（s
-
protein），再與 HRP 標記的檢測抗體結合，形成抗體
-
抗原
-
酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并
在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物可溶性蛋白質（s
-
protein）
呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中植物可
溶性蛋白質（s
-
protein）含量。
試劑盒組成：
試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片 2 片
密封袋 1 個 1 個
酶標包被板 1×48 1×96 2
-
8℃保存
標準品 0.3ml×6 管 0.3ml×6 管 2
-
8℃保存
酶標試劑 5 ml×1 瓶 10 ml×1 瓶 2
-
8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2
-
8℃保存
顯色劑 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2
-
8℃保存
顯色劑 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2
-
8℃保存
終止液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2
-
8℃保存
20×濃縮洗滌液 15ml×1 瓶 25ml×1 瓶 2
-
8℃保存
注：標準品濃度依次為：1500、750、375、187.5、93.75、0 μg/mL.
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10
-
20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000
-
3000 轉/分）。仔細收集
上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10
-
20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000
-
3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次
離心。
3.
尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000
-
3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.
細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000
-
3000 轉2
/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2
-
7.4）稀釋細胞懸液，細胞
濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分
鐘左右（2000
-
3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入
一
定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備
用。標本融化后仍然保持 2
-
8℃的溫度。加入
一
定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將
標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000
-
3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后
一
份待檢
測，其余冷凍備用。
6.
標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗，可將標本放于
-
20℃保存，但應避免反復凍融
.
7.
不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.
標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；。
2.
加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl
（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃
動混勻。
3.
加酶：每孔加入酶標試劑 100μl，空白孔除外。
4.
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
5.
配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
6.
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯
色 15 分鐘
.
8.
終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
9.
測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液
后 15 分鐘以內進行。
注意事項：
1．
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15
-
30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．
各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。
一
次加樣時間hao
控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．
請每次測定的同時做標準曲線，hao做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔第
一
孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋
一
定倍數（n 倍）后再測定，計
算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．
封板膜只限
一
次性使用，以避免交叉污染。
6．
底物請避光保存。
7．
嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準
.
8．
所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．
本試劑不同批號組分不得混用。
10.
如與英文說明書有異，以英文說明書為準。