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溶血標本可能會增加非特異性顯色
閱讀：123 發(fā)布時間：2023-6-1防止溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA 測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP也會發(fā)生假陽性反應。一般說來，5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃，標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。逾越一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混勻并防止發(fā)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過濾，廓清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保管作多次檢測，宜少量分裝冰存。保管血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。
要注意防止出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，以HRP為標記酶的ELISA 測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
樣本的采集及血清分離中要注意盡量防止細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌β-半乳糖苷酶自身會對用相應酶作標記的測定方法發(fā)生非特異性干擾。血清標本如是以無菌操作分離，則可以在28℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保管。樣本的長時間保存，應在-70℃以下。
冰凍保管的血清標本須注意防止因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發(fā)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可標本在保管中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測