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掌握培養(yǎng)基制備、滅菌及無(wú)菌檢測(cè)技術(shù)的過(guò)程和方法
閱讀：43 發(fā)布時(shí)間：2025-1-9一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
1.了解培養(yǎng)基的配置原理
2.掌握其制備過(guò)程和方法
二、實(shí)驗(yàn)原理
培養(yǎng)基是人們按照不同微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的需要而配置的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。用于微生物的分離純化培養(yǎng)鑒定和保存菌種。培養(yǎng)基的種類有很多，按對(duì)培養(yǎng)基的組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否了解可以分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。按照不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求，選擇可被迅速利用的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及其他營(yíng)養(yǎng)成分可制成不同的培養(yǎng)基。
三、實(shí)驗(yàn)器材
1.牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、NaCI、K2HPO4、KNO3、MgSO4FeSO4馬鈴、蔗糖、瓊脂、10%NaOH和10%HCI。
2.刻度搪瓷杯、天平、牛角匙、小燒杯、稱量紙、分裝漏斗、試管、棉花、鐵絲筐、電爐、玻棒、紗布。
四、實(shí)驗(yàn)操作
1.稱量：按照培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱取各種成分。
（1）牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基
牛肉膏 3克 蛋白胨 5克
NaCl 5克 瓊脂15-20克
水 1000毫升
PH調(diào)至7.2-7.4 0.1MPa壓力下滅菌30分鐘
（2）馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）
馬鈴薯 200克 蔗糖(白糖) 20克
瓊脂 15-20克 水1000毫升
去皮洗凈的馬鈴薯按量稱取，切成小塊，放在水中煮沸，并維持20一30分鐘，用雙層紗布過(guò)濾得馬鈴薯汁，補(bǔ)足到定量的水。自然pH值0.1MPa壓力下滅菌30分鐘。
（3）高氏一號(hào)培養(yǎng)基
可溶性淀粉 20克 KNO3 1克 K2HPO4'3H2O 0.5克 NaCl 0.5克 MgSO4'7H2O 0.5克 FeSO4'7H2O
pH調(diào)至7.2~~7.4先用少量的水將淀粉調(diào)成糊狀后再加水和其他的鹽類。0.1MPa壓力下滅菌30分鐘
2.溶化：
依配方順序，用少量的水溶解各成分，有時(shí)需加熱溶化，最后補(bǔ)足所需水量。在暴沸時(shí)添加少量的水抑制沸騰，融化過(guò)程需不斷攪拌。
3.調(diào)整pH：
用PH試紙或酸酸度計(jì)先試測(cè)初制備培養(yǎng)基的的PH值，然后用10%NaOH或10%HCⅠ調(diào)整至所需的pH范圍。
4.過(guò)濾：
在配制固體培養(yǎng)基時(shí)，事先將瓊脂稱好用冷水浸泡，洗凈擠干后加人液體培養(yǎng)基中，瓊脂融化的過(guò)程中，需不斷攪拌，并控制火力，不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦，待融化后，補(bǔ)足水分。
5.分裝：根據(jù)不同的需要，可將配制的培養(yǎng)基分裝在試管或三角瓶?jī)?nèi)，注意不要將培養(yǎng)基沾染在管口和瓶口上，以免粘住棉塞，引起污染。
6.裝棉塞或硅晈塞，棉塞粗細(xì)、長(zhǎng)短要求合適，外面再包一層報(bào)紙避免造成污染。
7.滅菌：
培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間和溫度，需按各種規(guī)定進(jìn)行，保證滅菌數(shù)果和不損失培養(yǎng)基的必要成分。滅菌后的培養(yǎng)基要趁熱擺成斜面，半固體要垂直放置，待冷卻即可成為斜面培養(yǎng)基和半固體深層瓊脂培養(yǎng)基，而且必須放在37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，無(wú)菌生長(zhǎng)方可使用。
五、注意事項(xiàng)
1.牛肉膏的稱取：
用玻璃棒蘸取適量牛肉膏，抹于稱量紙上，勿取過(guò)量，不足時(shí)，再蘸取少量，逐步添加；然后將牛肉膏連同稱量紙放入水中，稍等片刻牛肉膏即從稱量紙上脫落，用玻璃棒將紙撈出即可。
2.加瓊脂：
瓊脂一般應(yīng)在調(diào)好了pH后加入，瓊脂的加入不會(huì)影響pH，加入瓊脂后要控制火力并不斷攪拌，以免沸騰溢出或瓊脂糊底燒焦。加熱過(guò)程中因水分蒸發(fā)而可能使體積減小，應(yīng)補(bǔ)充水分至所需量。
3.滅菌前一定要用報(bào)紙包扎好。