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402次無酶細胞消化液不含蛋白消化酶,但能使貼壁細胞與培養瓶皿表面有效脫離達到分離細胞的目的。與常規胰蛋白酶消化方法相比,無酶細胞消化液作用溫和,不損傷和破壞細胞,不影響細胞生物學特性,是腫瘤細胞在體移植實驗的*細胞脫壁方法。細胞用無酶消化液脫壁后,可直接進行傳代培養或離心收集用于其它實驗。由于未使用蛋白酶制劑,因此特別適于收集細胞進行核蛋白和胞漿蛋白制備、Western Blot、免疫共沉淀實驗,同時能避免樣品蛋白降解,并避免蛋白酶制劑中的RNA酶對RNA的降解。
特點:
<室溫孵育10分鐘,貼壁細胞即可從瓶皿脫落,溫和而有效
<脫壁的細胞可用于連續傳代
<培養腫瘤細胞進行在體移植實驗的*消化方法
<避免蛋白酶過度消化細胞及降解樣品蛋白
<制備胞核和胞漿蛋白、進行Western Blot、免疫共沉淀
<避免蛋白酶制劑中污染的RNA酶降解RNA
包裝:100ml,200ml
儲存:4oC密封儲存2年。可重復高壓滅菌。
使用方法:
1. 用PBS洗滌單層培養細胞,盡可能*去除瓶中液體。
2. 加入適量無酶細胞消化液使其覆蓋細胞表面,晃動瓶皿,使所有細胞均充分接觸無酶消化液。
3. 室溫放置10分鐘或適宜時間,偶爾晃動瓶皿,直到細胞*脫壁。可加入細胞培養基或2-3倍體積PBS緩沖液終止反應。脫壁后可能有成片細胞連在一起的現象,屬于正常,如用作腫瘤移植,上述情況的產生可利于腫瘤細胞的生長。37oC時脫壁反應會加速。
4. 500 g 離心5-10分鐘,棄上清,收集細胞。
5. 收集的細胞可用于:(1) 胞核胞漿蛋白制備;(2) Western blot;(3) 免疫沉淀實驗;(4) DNA-蛋白結合實驗;(5) RNA提取;
(6) 分瓶傳代。
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