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糖原D-PAS染色液(淀粉酶消化法)注意事項(xiàng)

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中文名稱:糖原D-PAS染色液(淀粉酶消化法)
產(chǎn)品規(guī)格:5×50mL/×100mL
保存:4℃避光,12個(gè)月
分類:碳水染色
用途:區(qū)分黏蛋白和多糖
注意事項(xiàng):普通PAS染色法無(wú)法準(zhǔn)確鑒別黏液物質(zhì)(如黏液物質(zhì)或多糖),本染色液在PAS染色之前有糖原消化步驟,需要做陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果為:淀粉酶處理的片子糖原陰性,而對(duì)照呈紅色或紅紫色。

簡(jiǎn)介:糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年蕞先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來(lái)顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、真菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。糖原D-PAS染色液的特點(diǎn)在于糖原PAS染色之前經(jīng)淀粉酶處理,糖原消化時(shí)需要兩張相同的切片,脫蠟后一張切片用含有淀粉酶的適當(dāng)緩沖液處理,另一張僅用緩沖液處理。然后兩張切片均用PAS法染色,消化后染色消失表明存在糖原


操作步驟(僅供參考):
1、兩張相同切片,二甲苯脫蠟,梯度乙醇入水。
2、一張切片入37℃淀粉酶溶液處理1h。
3、流水沖洗兩張切片各5~10min。
4、入過(guò)碘酸溶液,室溫放置。
5、自來(lái)水沖洗1次,再用蒸餾水浸洗2次。
6、入SchiffReagent,置于室溫陰暗處浸染。
7、自來(lái)水沖洗10min。
8、入Mayer蘇木素染色液染細(xì)胞核。
9、(可選)酸性乙醇分化液分化。10、自來(lái)水沖洗,更換蒸餾水清洗使其返藍(lán)。
11、二甲苯透明,中性樹(shù)膠封固。


染色結(jié)果:
糖原、中性,唾液黏蛋白   紅紫色
各種糖蛋白    紅紫色
未處理的切片,糖原呈亮紅色或紅紫色;淀粉酶處理的切片,糖原陰性。

注意事項(xiàng):
1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈,否則影響染色效果。需使用一張陽(yáng)性對(duì)照片驗(yàn)證酶的活性。
2、過(guò)碘酸氧化時(shí)間不宜過(guò)久,氧化時(shí)溫度以18~22℃蕞佳。
3、酸性乙醇分化液應(yīng)經(jīng)常更換新液,其分化時(shí)間應(yīng)該依據(jù)切片厚薄、組織的類別和酸性乙醇分化液的新舊而定。
4、在過(guò)碘酸溶液和SchiffReagent中作用時(shí)間非常重要,該依據(jù)切片厚薄、組織類別等決定。

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