產品名稱：BCIP/NBT堿性磷酸酶顯色試劑盒
英文名稱：BCIP/NBTAlkalinePhosphataseColorDevelopmentKit
分類：免疫印跡
規格：100ml
儲存條件：4℃,避光,12個月
用途：免疫印跡檢測中的發色底物顯跡,尤其適用于堿性磷酸酶系統。
注意事項：用NBT氧化后,BCIP水解產生靛藍沉淀物。

產品說明：
本產品是一種用于免疫組化顯色、Western等膜顯色和誘導多功能干細胞iPS鑒定等的試劑盒。

本試劑盒可以用于細胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導多功能干細胞iPS的鑒定，也可以用于Western等結合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測。同時也可以用于細胞或組織內源性的堿性磷酸酯酶顯色。

顯色原理：
BCIP/NBT是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP會被水解產生強反應性的產物，該產物會和NBT發生反應，形成不溶性的深藍色至藍紫色的NBT-formazan。

背景資料：
堿性磷酸酯酶(AP/ALP/AKP)常被稱作堿性磷酸酶(EC3.1.3.1)，是一類水解酶，通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白質和生物堿等，并在堿性條件下最為有效。該酶是一組同功酶的統稱。常見的小牛腸堿性磷酸酶(CalfIntestinalAlkalinePhosphatase,CIAP/CIP)被廣泛用于二抗等的標記最終用于蛋白和核酸等的檢測，也常用于DNA或RNA5’和3’末端的去磷酸化(去單磷酸化)，特別是質粒的5’末端去磷酸化以避免質粒自連等。

產品組成：
組分  規格
堿性磷酸酯酶顯色緩沖液    100mL
300×BCIP溶液    350μL
150×NBT溶液    700μL

保存：4℃避光，有效期一年。

注意事項：
BCIP對人體有刺激性，NBT對人體有害，請注意適當防護。
本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法：
1.對于組織切片或細胞樣品或膜，在與堿性磷酸酯酶標記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當洗滌液洗滌3～5次，每次3～5分鐘。對于檢測內源性堿性磷酸酯酶的組織或細胞樣品，在適當固定后，也用適當洗滌液洗滌3～5次，每次3～5分鐘。

2.按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成BCIP/NBT染色工作液：
堿性磷酸酯酶顯色緩沖液    3mL    10mL
300×BCIP溶液    10μL    33μL
150×NBT溶液    20μL    66μL
BCIP/NBT染色工作液    3.03mL    10.1mL

3.最后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量BCIP/NBT染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。
4.室溫避光孵育5～30分鐘或更長時間(可長達24小時)，直至顯色至預期深淺。
5.去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸餾水洗滌1～2次即可終止顯色反應。
6.對于組織切片或細胞樣品，顯色反應終止后，如有必要可以用中性紅染色液染色，以便于觀察。對于膜，顯色反應終止后，可以室溫晾干避光保存。