1. 目的Objective / Purpose
規定豚鼠紅細胞制備方法,以及外購豚鼠血細胞的管理辦法,指導操作人員實驗操作,保證檢驗結果的正確性。
2. 適用范圍Scope適用于實驗使用的1%以及各濃度鼠紅細胞的制備。
3. 責任部門(人)及權限Responsible department (person)and authority
自制豚鼠血由QC 動物實驗員或活鼠供應廠家獸醫負責豚鼠血采集,QC 檢測人員或車間使用人員負責按照本規程進行樣品豚鼠紅細胞制備及使用;QC 負責人及監管人員有權對檢測過程及結果進行監督檢查,有權制止不符合規程的操作并向QA 提出重試請求,得到QA 批準后方可進行重試。必須開啟偏差程序來解決不符合規程的操作。
4. 定義、符號和縮略語Definition, signal andabbreviationNA
5. 物料和設備Materials and equipment
5.1 生理鹽水:即0.85% 氯化鈉溶液,取氯化鈉8.5g,溶解于1000ml 純化水即得。
5.2 1ml 或2ml 5ml 一次性注射器,冰箱等
5.3 阿氏液:葡萄糖2.05g,檸檬酸鈉0.80g,檸檬酸0.05g,氯化鈉0.42g,加蒸餾水加至100ml
以上藥品混合后加熱溶化,115℃10 分鐘滅菌,4℃保存,有效期半年。
6. 規程Procedure
6.1 豚鼠血采集:采用心臟采血法。
6.1.1 先將鼠臥于手心保定,剪去心前區部位的被毛。
6.1.2 壓迫豚鼠,讓其心臟加速以確定下針部位,對該部位使用75%酒精消毒。
6.1.3 預先吸入約0.5~1ml 阿氏液于1 或2ml 注射器中,實驗者手持有針頭的注射器,在左側第3~4 肋間,用左手食
指摸到心搏處,右手取連有4~5 號針頭的注射器,選擇心搏強處穿刺,當針刺入心臟時,血液由于心臟跳動的力量自動進人注射器。
6.1.4 一般情況下,一只成年豚鼠可采血3-5ml 血,且注意抽血時一定要緩慢。采完后要壓迫止血。
6.2 豚鼠血保存:外購豚鼠血按照供應商推薦的保存條件及有效期。自采豚鼠血與阿氏液混勻,置入15ml 離心管中,在2~8℃保存,有效期二周。
6.3 豚鼠紅細胞制備:使用前處理豚鼠血,步驟如下:
1500rpm 離心5min,棄去上清液。加生理鹽水至15ml,搖勻,1500rpm 離心5min,棄去上清液,重復兩次,后一次離心10 分鐘。用無菌生理鹽水配制成2%或實驗所需鼠紅細胞懸液即得,置2~8℃備用,有效期7 天。
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