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MC3T3-E1 小鼠胚胎成骨細胞前體細胞實驗步驟

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收到常溫細胞后如何處理?
1、首先,觀察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,并及時與Procell(所拍照片將作為后續服務依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時,以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養瓶內培養基,預留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養,補加培養基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

 

 

溫馨提醒:
1、可將培養瓶內多余的培養基轉移至50ml無菌離心管中,備用;細胞傳代時,可以將該培養基按照一定比例和客戶自備的培養基混合使用,讓細胞逐漸適應培養條件。
2、確認細胞狀態良好后,應及時將部分細胞凍存,再進行后續的實驗,避免后期實驗失誤可能發生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失,影響后續實驗。
3、建議客戶收到細胞后前3天,100X、200X、400X各拍3張細胞照片,記錄細胞狀態,便于后續和Procell溝通交流。

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