不論是對活體還是體外培養(yǎng)的哺乳動物細胞，慢病毒表達載體對遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)導效率至關重要。慢病毒早起源于人免疫缺陷病毒 （HIV） 或貓免疫缺陷病毒（FIV），能夠感染幾乎所有類型的細胞，包括難以用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染甚至無法用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細胞。

許多客戶對如何用慢病毒顆粒進行轉(zhuǎn)導持有疑問，特別是對如何選擇適合的慢病毒量感到困惑。這個問題可根據(jù)確定細胞的感染復數(shù)（Multiplicity of Infection, MOI）來解決。

什么是 MOI？
選購慢病毒顆粒之前，首先需了解目的細胞的感染復數(shù)：MOI。MOI 的概念很簡單，可有效感染細胞的慢病毒顆粒數(shù)與被感染細胞數(shù)的比值即為該細胞的 MOI 值。

例如，應用 106 TU 慢病毒感染 106 個細胞可成功使 80% 以上細胞達到轉(zhuǎn)導目的時，MOI=1；如需要以 5 × 106 TU 病毒才可成功感染 106 個細胞，則 MOI = 5。（TU/mL 為慢病毒滴度單位，TU 表示有活性的慢病毒量）

如何確定目的細胞的 MOI 值？
慢病毒對不同類型細胞的轉(zhuǎn)導效率各不相同，因此 MOI 也各異。在此，我們列出了多種常用細胞系的 MOI，助您選購合適的慢病毒量。下表是 GeneCopoeia 通過實驗摸索得出的多種細胞系的 MOI 參考值。

了解慢病毒滴度是獲得 MOI 的前提條件。根據(jù)上表，若您的實驗對象是ru腺癌細胞系 MCF-7，其 MOI 參考值= 2，那么當您購買了 50μL 的慢病毒顆粒（滴度是 108 TU/mL）時，您得到的慢病毒總量為 5×106TU。在 MOI= 2 的條件下，您所購買的慢病毒足夠轉(zhuǎn)導 MCF-7 在 24 孔板中鋪板培養(yǎng)的其中 5 孔（約合 4×105 細胞/孔）。若您的目的細胞系 MOI 要求較高，您需要購買或自行包裝更多慢病毒顆粒。

請注意：
上表所示的 MOI 值僅供您選購慢病毒時作為用量參考。根據(jù)細胞狀態(tài)、操作手法等的差別，實際數(shù)據(jù)可能有輕微浮動。所以當您收到所購買的慢病毒時，我們?nèi)匀唤ㄗh您通過設計梯度 MOI 感染小量細胞實驗（如：MOI = 0.3, 1, 3, 5, 10, etc.）檢測目的細胞的轉(zhuǎn)導效率，確認其 MOI 值。另外，若您的實驗細胞未被列在上表中，梯度實驗確定 MOI 是至關重要，甚至*的。您可將病毒進行梯度稀釋，分別感染等量的細胞。

進行轉(zhuǎn)導的 1 天前，于 96 孔板鋪板培養(yǎng)目的細胞 （實例中使用了 H1299 細胞）；在進行轉(zhuǎn)導當天，以 10 倍梯度稀釋慢病毒并分別進行轉(zhuǎn)導；轉(zhuǎn)導 72 小時后以熒光顯微鏡觀察 GFP 報告基因表達情況，確定該細胞在轉(zhuǎn)導效果下的慢病毒量。

后，若您的實驗細胞要求較高的 MOI 值， 您還可通過以下幾種方法將其降低。方法一是加入 polybrene （hexadimethrine bromide）， 一種能夠減少病毒與細胞膜間電荷排斥作用的陽離子聚合物。另一種方法是使用能夠捕獲慢病毒顆粒的磁珠（例如，利用磁珠可成功地將 MM-AN 細胞的 MOI 從 16 降到 4）。購買或構(gòu)建克隆時，可選擇載體骨架上帶有標記基因（如：Puromycin, Neomycin 等）的克隆，可方便后續(xù)進行藥物篩選，建立將目的基因成功地隨機整合到特定細胞的穩(wěn)定細胞株。

GeneCopoeia 提供基于慢病毒表達載體的人源及小鼠源的 ORF, 啟動子，shRNA, pre-miRNA, microRNA inhibitor, 以及 CRISPR sgRNA 表達克隆（質(zhì)粒）。另外，我們還提供慢病毒包裝服務、LentiFectTM 慢病毒包裝試劑盒（包含滴度增強劑），慢病毒濃縮試劑和 EndofectinTM 轉(zhuǎn)染試劑等，實現(xiàn)一站式慢病毒解決方案。