Hepes是一種通用的兩性離子緩沖劑，不結(jié)合鎂，鈣，錳或銅離子。其中細胞培養(yǎng)應(yīng)用的緩沖液強度通常在10至25mm之間，在加入Hepes后，用NaOH或HCl調(diào)節(jié)pH。必須注意保持培養(yǎng)基中的重量克分子滲透壓濃度，并且需要評估對于給定細胞系的毒性。根據(jù)文獻得到，HEPES在控制pH方面優(yōu)于碳酸氫鈉。

Hepes的緩沖液可以通過好幾種方法來制備，可以將游離酸添加到水中，然后用大約一半摩爾當量的氫氧化鈉或氫氧化鉀滴定至所需的pH。或者，相等摩爾濃度的Hepes和Hepes鈉鹽，可以將它們以大約相等的體積混合，然后用任一種溶液反滴定至合適的pH。可以用HCL滴定鈉鹽，得到一半當量的氯化鈉。但是，離子強度的增加會改變?nèi)芤旱闹亓靠朔肿訚B透壓濃度。Hepes半鈉的大多數(shù)溶液都會溶解在水中，形成pH值7.5，幾乎不用做調(diào)整。

Hepes緩沖鹽水（2X）的倆種配方：

1、氯化鈉1.6克

lv化鉀0.074克

Na2HPO4二水合物0.027克

葡萄糖0.2克

HEPES，游離酸1克

將上述成分溶解在總體積為90毫升的蒸餾水中，用0.5 N NaOH調(diào)節(jié)pH到7.05，然后調(diào)節(jié)用蒸餾水定容至100毫升。通過0.22微米的過濾器對溶液進行滅菌，分裝在-20°C下。

2、氯化鈉16.4克

HEPES，游離酸11.9 g

Na2HPO4 0.21克

水 1升

加入上述成分并攪拌直至溶解，用5 M NaOH滴定至pH 7.05（準確的pH值非常重要），篩選消毒。

在與轉(zhuǎn)染實驗一起使用之前測試制劑，通過將0.5 ml的上述緩沖液與0.5 ml的250 mM CaCl2混合并渦旋進行測試。應(yīng)形成細的沉淀物，該沉淀物在顯微鏡下很容易看到。如果沒有形成沉淀，不要將這批緩沖液用于轉(zhuǎn)染實驗。