古朵資訊—ELISA常見問題

　　1. 產(chǎn)品有哪幾種規(guī)格?可檢測多少個(gè)樣本?

　　產(chǎn)品分為48T和96T兩種規(guī)格。

　　每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般設(shè)7個(gè)不同濃度，加上空白孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線一共需要8個(gè)孔。因此，一個(gè)48T試劑盒最多可以測定40個(gè)樣本(不做重復(fù)且一次用完)，一個(gè)96T試劑盒最多可以測定88個(gè)樣本(不做重復(fù)且一次用完)。可以根據(jù)實(shí)際樣本數(shù)量和實(shí)驗(yàn)計(jì)劃選擇合適的產(chǎn)品規(guī)格。

　　2.48T和96T的試劑盒有哪些不同?

　　48T和96T的試劑盒，每個(gè)孔的反應(yīng)體系都是一樣的。不同的是試劑盒中各組分的規(guī)格，詳見說明書。

　　3. 產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何?

　　產(chǎn)品在研發(fā)前期已通過嚴(yán)格的穩(wěn)定測試，發(fā)貨前亦須通過檢測并提供質(zhì)檢報(bào)告，在市場上深受廣大客戶的贊許!

　　4.貴公司有沒有酶活性檢測的試劑盒?

　　酶活力的測定實(shí)際上就是測定酶促反應(yīng)的速率。酶活力的大小即酶含量的多少，可以用每克酶制劑或每毫升酶制劑含有多少酶單位來表示，單位是U/g或U/ml。酶活力的測定方法：⑴測定完成一定量反應(yīng)所需的時(shí)間，⑵測定單位時(shí)間內(nèi)酶催化化學(xué)反應(yīng)量。主要通過產(chǎn)物的增加量或底物的減少量來測定。常用的方法有：⑴分光光度法，⑵熒光法，⑶同位素測定法，⑷電化學(xué)法。

　　ELISA的方法一般是對可溶性抗原或抗體進(jìn)行定性和定量的檢測，所以酶活性是不能用ELISA來檢測的。

　　5.一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要多長時(shí)間?

　　雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要4-4.5小時(shí)，競爭ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí)。

　　6.血清樣本如何處理?

　　全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　7. 血漿樣本如何處理?

　　應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　8. 尿液樣本如何處理?

　　用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

　　9.細(xì)胞上清液樣本如何處理?

　　檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心10分鐘左右(5000×g)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　10. 組織樣本如何處理?

　　用預(yù)冷的PBS (0.01M,pH=7.4)沖洗組織，以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測量結(jié)果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘，取上清檢測。

　　11.為什么有的試劑盒是采用競爭ELISA法?

　　小分子抗原或半抗原因?yàn)槿狈勺鲓A心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法。其原理是標(biāo)本中的抗原和固相載體上的抗原競爭化抗體上的結(jié)合位點(diǎn)，標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的化抗體愈少，最后的顯色也愈淺，即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

　　12.用什么軟件處理ELISA檢測的數(shù)據(jù)比較好?

　　ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合可以應(yīng)用Curve Expert軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。它使用非常方便，可以生成漂亮的曲線應(yīng)用到論文之中。軟件可以在下載中心進(jìn)行下載。

　　13. 試劑盒做的結(jié)果不理想怎么辦?

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想請及時(shí)與客服或技術(shù)支持聯(lián)系，我們可以幫您一起分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果僅憑實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)無法判斷，您可以將試劑盒發(fā)回給我們進(jìn)行售后檢測。如果是試劑盒本身的質(zhì)量問題，可以為您退換貨;如果是實(shí)驗(yàn)操作的問題，技術(shù)人員可以給您一些改進(jìn)的建議。

　　14.使用Elabscience ELISA Kit發(fā)表論文有獎(jiǎng)勵(lì)嗎?

　　如果您使用我公司的ELISA Kit且已發(fā)表論文，可以獲得500～2000元獎(jiǎng)學(xué)金或代金券，具體獎(jiǎng)勵(lì)政策請咨詢銷售人員。

　　15.怎樣處理elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果?

　　1.ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。

　　2.平均OD值減去空白孔的OD值。

　　3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法。建議使用合適的軟件來作圖，比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條最合適的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù)，將對應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度最高的那條曲線。

　　ELISA 酶聯(lián)免疫吸附法 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。