古朵技術大全—ELISA試劑盒常見問題整理

　　1、1個96T試劑盒能測多少個樣?

　　2、標準品500ml(96T/48T)，能夠測多少次?

　　1)單標可以測四次

　　2)雙標可以測兩次

　　3、血液樣本如何選擇測ELISA?

　　1、血漿全血標本經(jīng)抗凝分離后去除血細胞成分即為血漿，主要化學成分測定和凝血項目檢測等。

　　2、血清是血液離休凝固后分離出來的液體，血清與血漿相比較，主要是缺乏纖維蛋白原，某些n血因子也發(fā)生了變化。血清主要用于化學和免疫學等檢測。

　　說明書上一般寫血漿和血清都可以檢測，根據(jù)需要選擇，例如：纖維蛋白原檢測用血漿樣本，血清樣本檢測纖維蛋白原殘留。

　　4、血液樣本發(fā)生溶血是否能檢測?

　　輕微溶血勉強可以檢測，明顯溶血建議重新取樣，溶血因紅細胞破壞溶解時釋放大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA，會導致非特異性顯色，干擾測定結(jié)果。

　　5、組織樣本操作流程：

　　1) 組織樣本必須保持鮮重，如果是凍存的組織，應該室溫平行2小時以上，然后用生理鹽水沖洗干凈，再用濾紙把周圍的水分吸干，稱重!組織重量不能低于50mg;

　　2)組織勻漿液選取是PBS(PH=7.2-7.4，濃度為0.01mol/L)勻漿的比例為1:10，相當于1g組織加9ml的勻漿液;

　　3)組織勻漿后，離心取上清，離心轉(zhuǎn)數(shù)為5000轉(zhuǎn)，但不能超過5000轉(zhuǎn)，時間為15分鐘;

　　4) 實驗中樣本提取的是200mg的樣本加1.8ml的勻漿液。

　　6、組織樣本操作中的常見問題：

　　1)問：從各樣品中取了同樣大小的肉塊吧?具體是取了多少?怎么取的?稱重方式嗎?之前好像提到過肉塊大小的尺寸，是不是用其他方式做到了各樣品的起始量的一致?

　　答：對于組織，不可能確定好每塊組織都達到恒定的重量，這個不太現(xiàn)實。都是按照固定的勻漿比例(勻漿比例為10%)，相當于1g組織加9ml的勻漿液，重量小的，勻漿液也會少。最終的濃度是不變的!

　　2)問：測定樣品時需要將樣品制成液體樣本吧?請問是如何做成液體樣品的?勻漿嗎?如果是勻漿方式的話應該有溶劑的，使用了哪些溶劑呢?

　　答：勻漿比例在上面已經(jīng)告訴了，勻漿液采用的是0.01mol的PBS(磷酸鹽緩沖液)PH控制在7.2-7.4。

　　7、ELISA試劑盒操作細節(jié)常見問題整理：

　　1)問：是不是空白對照就是什么都不加?

　　答：不加樣本，不加樣本稀釋液，不加酶標試劑，其他都可以加。

　　2)問：樣本稀釋液是配好的嗎?

　　答：樣本稀釋液是配好的。

　　3)問：樣本稀釋液可以用來直接稀釋血清嗎?

　　答：可以的，直接加40ul就可以了。

　　4)問：洗滌液是濃縮的;是一次配好，還是現(xiàn)配現(xiàn)用?謝謝。

　　答：濃縮的，現(xiàn)配現(xiàn)用。

　　5)問：加入的顯色液A\B分別是什么物質(zhì)?作用原理?

　　答：顯色劑A和B，是經(jīng)典的TMB顯色系統(tǒng)。具體原理可以參考免疫方面的教科書。在這里不詳細列出。

　　6)問：終止液是什么物質(zhì)?如何做到終止反應的?

　　答：終止液是2mol的硫酸溶劑。終止反應也是和原理相關。這個參考教科書!

　　7)問：稀釋液是什么成分?

　　答：標準稀釋液是PBS(PH=7.2-7.4，濃度是0.01mol/L)。樣本稀釋液是含有0.5%BSA的PBS(PH=7.2-7.4，濃度是0.01mol/L)。

　　8)問：需要避光保存的試劑是哪個?

　　答：需要避光的是顯色液B。

　　9)問：試劑盒從冰箱取出后，室溫放置會影響其效果嗎?

　　答：試劑盒在做實驗前應該要室溫平衡一小時。短時間(3、4小時)沒有任何影響。

　　10)問：樣品研磨后是立即離心，還是在4度冰箱里提取幾個小時以后再離心?

　　答：樣本研磨后立即離心即可。

　　補充：5%BSA 封閉液(Blocking Buffer)適用于 Western Blotting、ELISA 以及免疫組化實驗中非特異性蛋白結(jié)合位點的封閉。

　　8、樣本保存條件和時間怎么選擇?

　　9、最后如果樣本數(shù)據(jù)沒有達到預期效果，不要慌，可以按下面流程排查問題，或者聯(lián)系公司技術。

　　ELISA檢測試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質(zhì)量"的方針。