ELISA夾心法實驗步驟和注意事項

　　今天古朵技術(shù)小編和大家分享的是ELISA夾心法實驗步驟以及注意事項。

　　1.包被

　　pH9.5 碳酸鹽緩液稀釋4D7單克隆抗體粗提γ球蛋白至1 μg/ml，加入96孔板，100 μl/孔，放4 ℃，36 小時。

　　2.封閉

　　0.1 %吐溫PBS(Buffer A)沖洗96孔板三次，加3 %BSA Buffer A(Buffer B)200 μl/孔，放37 ℃，1 小時。

　　3.加待檢樣品

　　Buffer A 沖洗96孔板三次，加待檢樣品及Buffer B 稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品100 μl/孔，放37 ℃，3 小時。

　　4.加酶標(biāo)抗體

　　Buffer A沖洗96孔板五次，3 %PEG Buffer A稀釋酶標(biāo)抗體至1∶800，加入96孔板，100 μl/孔，放37 ℃，1 小時。

　　5.顯色

　　Buffer A沖洗96孔板五次，pH5.4檸檬酸緩沖液溶解底物(ABTS))，0.2 mg/ml，加3 %H2O2，2 μl/ml，加入96孔板，100 μ/孔，室溫下或37 ℃顯色。

　　注意事項

　　1.待檢標(biāo)本如為血清，應(yīng)采用一次性容器，血液采集后盡快(6小時以內(nèi))分離血清。

　　2.封閉液或抗體稀釋液應(yīng)新鮮配制或凍存。

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