對于ELISA固體樣本處理方法您知道多少?

　　固體樣本處理原則：稱取1g的固體樣本，用9g的合適緩沖液溶解，分泌蛋白可以直接離心取上清檢測，細胞內的蛋白，要先收集細胞，再用合適方法破碎，離心取上清測試。

　　1、組織標本：切割標本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，仔細收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。對于植物組織，不好勻漿的話，就用液氮研磨，將植物組織放在研缽中，加入適量液氮，充分研磨。

　　2、細胞內蛋白樣本：

　　許多待測蛋白不是分泌蛋白，而是存在于細胞內的蛋白，這個時候，要先收集細胞，洗滌干凈，再破碎細胞，離心取上清。

　　(1)培養的細胞

　　A、動物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融(如果反復凍融，破碎效果不好，就采用超聲波破碎)，以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　B、植物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到100萬/ml左右，置于冰盒上，用超聲破碎儀，設置破碎2s，冷卻30s的方式，充分破碎細胞，以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　(2)組織的細胞

　　切割標本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。

　　3、土壤：稱取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工將標本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，仔細收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。如果是測分泌蛋白，直接取上清檢測，測試細胞內蛋白，要破碎細胞。

　　4、咽拭子：加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子頭部，搖勻，用鑷子取出咽拭子并擠干液體，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，仔細收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。如果是測分泌蛋白，直接取上清檢測，測試細胞內蛋白，要破碎細胞。

　　5. 植物標本的采集及保存

　　1、 稱取0.1g(誤差±3%以內)新鮮植物組織樣本，在液氮中充分研磨;

　　2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過一夜;

　　3、 于4度，8000rpm，離心1小時，取上清;

　　4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是： 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%yi醚(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干，保存備用;

　　5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)。混勻后室溫放置30分鐘，然后4度離心(8000rpm，15分鐘)，取上清并暫時保存于4度待用。

　　ELISA試劑盒 樣本收集注意事項：

　　1、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

　　2、標本采集后盡快進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

　　3、以上的內容是通用的樣本處理方法，無法涵蓋各種樣本，對于一些特殊樣本，建議實驗人員多參考已發表的文獻，自行設計合理的樣本處理方法或者來電詳詢，恒遠將為您安排技術專員進行指導。

　　ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。