古朵快訊：質(zhì)粒載體的基本特征與分類介紹

　　質(zhì)粒載體是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上為適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室操作而進(jìn)行人工構(gòu)建的質(zhì)粒。與天然質(zhì)粒相比，質(zhì)粒載體通常帶有一個(gè)或一個(gè)以上的選擇性標(biāo)記基因(如抗生素抗性基因)和一個(gè)人工合成的含有多個(gè)限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn)序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量盡可能減少，以便于基因工程操作。

　　質(zhì)粒(plasmid)是細(xì)菌或細(xì)胞染色質(zhì)以外的，能自主復(fù)制的，與細(xì)菌或細(xì)胞共生的遺傳成分。其特點(diǎn)如下：

　　染色質(zhì)外的雙鏈共價(jià)閉合環(huán)形DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)，可自然形成超螺旋結(jié)構(gòu)，不同質(zhì)粒大小在2-300kb之間，<15kb的小質(zhì)粒比較容易分離純化，>15kb的大質(zhì)粒則不易提取。

　　質(zhì)粒分為嚴(yán)緊型和松弛型復(fù)制。

　　根據(jù)質(zhì)粒DNA復(fù)制與宿主之間的關(guān)系或在宿主細(xì)胞的拷貝數(shù)的多少，可以將質(zhì)粒分為兩種不同的復(fù)制類型：嚴(yán)緊型和松弛型。嚴(yán)緊型質(zhì)粒復(fù)制受宿主染色體DNA復(fù)制的嚴(yán)格控制，拷貝數(shù)較小一般只有1~3個(gè)拷貝。疏松型質(zhì)粒的復(fù)制宿主的控制比較松，在宿主中的拷貝數(shù)比較多，一般有10~200個(gè)拷貝，有時(shí)可達(dá)到700個(gè)。

　　按基因轉(zhuǎn)移性：

　　分兩類：

　　(1)傳遞性質(zhì)粒：常為大型、嚴(yán)緊型質(zhì)粒;

　　(2)非傳遞性質(zhì)粒：多為小型、松弛型質(zhì)粒。

　　按遺傳性狀、產(chǎn)物分類：

　　(1)抗生素抗性：

　　(2)限制酶-修飾酶(R-M)系統(tǒng)：如hsdR-菌株可使DNA甲基化，但不限制外源DNA;hsd-菌株為限制和甲基化雙缺陷型。

　　人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體分類：

　　高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體：

　　ColE1、pMB1派生質(zhì)粒具有高拷貝數(shù)的特點(diǎn)。適合大量增殖克隆基因，或需要大量表達(dá)的基因產(chǎn)物。

　　低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體：

　　由 pSC101派生來的載體特點(diǎn)是分子量小的拷貝數(shù)。它有特殊的用途：當(dāng)有些被克隆的基因的表達(dá)產(chǎn)物過多時(shí)會(huì)嚴(yán)重影響寄主菌的正常代謝活動(dòng)，導(dǎo)致寄主菌的死亡時(shí)，就需要低拷貝的載體。

　　失控的質(zhì)粒載體

　　這是一類溫度敏感型復(fù)制控制質(zhì)粒。如pBEU1、 pBEU2。

　　插入失活型克隆載體。載體的克隆位點(diǎn)位于其某一個(gè)選擇性標(biāo)記基因內(nèi)部。如pDF41、pDF42。

　　正選擇的質(zhì)粒載體

　　直接選擇轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞。只有帶有選擇標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)化菌細(xì)胞才能在選擇培養(yǎng)基上生長。

　　上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。