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抗體稀釋液和ELISA相關溶液的配制
1、抗體或免疫球蛋白稀釋液0.01mol/L pH7.2PBS
NaH2PO4·2H2O0.39克
Na2HPO41.27克
NaCl0.85克
NaN3200mg
H2O(蒸餾水)至 1000ml
2、ELISA洗液及HRP標記抗體稀釋液PH7.4,PBST
NaCl2.0克
KH2PO40.2克
Na2HPO4·12H2O2.9克
KCl0.2克
NaN30.2克
H2O至 1000ml
吐溫(Tween)200.5ml
4°C保存備用
3、包被液(簡稱CB)pH9.6
Na2CO31.59克
NaHCO32.93克
NaN30.2克
H2O至 1000ml
密封蓋好,4°C存放備用
4、ELISA底物液(可溶性底物)
磷酸-檸檬酸緩沖液pH5.0
0.1mol/L檸檬酸(21.014克/100ml)24.3ml
0.2mol/L Na2 HPO4(28.4克/1000ml)25.7ml
H2O50ml
4°C存放備用
5、DAB底物液(不溶性底物,組化病理等)
0.05mol/L pH7.6 Tris-HCL
Tris6.05克
HCL(36%)3.15克(約2.7ml濃HCL)
H2O至 1000ml
DAB為3′,3′二氧基聯苯胺,不溶性底物,呈棕紅色
6、DAB溶液配制:(組化及Western blot 顯色)
稱DAB30mg,用0.05mol/L pH7.6Trs-HCL緩沖液100ml溶解,如有沉淀,過濾后使用,一般新鮮配制使用。用前加入1%H2O2 1-1.5ml,H2O2濃度為0.01%,混均后使用。 7、3′,3′,5′,5′,-四甲基聯苯胺(TMB)溶液配制:
用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或無水乙醇,將TMB配成1%濃度,4°C保存半年以內使用。使用前,用pH5.0磷酸-檸檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mg/TMB)1%TMB液,再按每毫升TMB加入30%的H2O2 1ul,混勻后立即使用。2N H2SO4終止后,450nm測定OD值。
8、1%離子瓊脂膠配制液
作免疫雙相擴散,單相擴散及免疫電泳中使用。
0.05UpH8.6巴bi妥鈉-HCL緩沖液
巴bi妥鈉23.8克
1mol/L HCL34.5ml
H2O2150ml
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