古朵詳解：elisa的類型及實驗原理

　　ELISA法類型：

　　夾心法常用于檢測大分子抗原，將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體，重復兩次，洗去多余未鍵結二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果。

　　間接法常用于檢測抗體，將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原，重復兩次。洗去多余未鍵結二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器測定塑膠盤中的吸光值，以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含量。

　　競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體;加入待測檢體、帶有酶的抗原，與塑膠孔盤上的抗體專一性鍵結。塑膠孔盤上固著抗體數量有限，檢體中抗原量越多，帶有酶的抗原可鍵結固著抗體就越少。

　　夾心法

　　夾心法常用于檢測大分子抗原，一般之操作步驟為:

　　將具有專一性之抗體固著(coating)于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

　　加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

　　洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一之一次抗體，與待測抗原進行鍵結

　　洗去多余未鍵結一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結

　　洗去多余未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果

　　間接法

　　間接法常用于檢測抗體，一般之操作步驟為：

　　將已知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余之抗原。

　　加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結。

　　洗去多余待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結。

　　洗去多余未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，藉儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值)，以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含量。

　　競爭法

　　競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

　　將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

　　加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

　　加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。

　　洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

　　當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。

　　elisa實驗原理：

　　在測定時把受檢標本和酶標抗原或抗體，按不同步驟與固相載體表面抗原或抗體起反應。用洗滌方法使固相載體上的抗原抗體復合物與其他物質分開，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。

　　加入酶反應的底物后，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺有無定性或定量分析。

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