大鼠高敏甲狀腺素(u-T4)ELISA試劑盒實驗注意事項

　　1)ELISA實驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制實驗條件，待檢樣品應(yīng)一式二份，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、免血清等封閉。

　　2) 在ELISA實驗中，進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

　　(1)ELISA實驗固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為國相載體，如聚氯乙、聚苯乙烯、聚內(nèi)胺和纖維素等，形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。

　　目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管選擇何種載體，在使用前均可進(jìn)行信選:用等量抗原包被，在同一實驗條性下進(jìn)行反應(yīng)觀察其顯色反應(yīng)的均一性，據(jù)此判明其吸附性能。

　　(2) ELISA實驗包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載本表面時，要求度要好，吸附時一股要求pH在9.09.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響，一般多采用418-24h。蛋白質(zhì)包被的Zu適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10ugml等)進(jìn)行包被后，在其它實驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值，選擇OD值zu大而蛋白量2u少濃度，對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1-10ug/ml.

　　(3)ELISA實驗中酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA實驗法進(jìn)行初步效價的滴定，然后再固定其它條件或采取方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式ELISA實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。(4)ELISA實驗中酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯的顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供體，底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)，通常底物作用時間，以10-30 m為直，底物使用液必須新鮮面制，尤其是在臨用前加入。

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