古朵資訊：免疫組化實驗所用的組織和細胞標本
 

　　實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片，后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本*常用、*基本的方法，對于組織形態保存好，且能作連續切片，有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔，供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響，但可進行抗原修復，是免疫組化中的組織標本制作方法。

　　免疫組化常用的染色方法有哪些?

　　根據標記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標法，親和組織化學法，后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。

　　石蠟切片為什么要做抗原修復?有哪些方法?

　　石蠟切片標本均用甲醛固定，使得細胞內抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時蛋白之間發生交聯而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進行IHC染色時，需要行抗原修復或暴露，即將固定時分子之間所形成的交聯破壞，而恢復抗原的原有空間形態。常用的抗原修復方法有微波修復法，高壓加熱法，酶消化法，水煮加熱法等，常用的修復液是pH6.0的0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。

　　石蠟切片在染色過程中出現脫片現象：

　　①烤片時間不夠，或溫度不夠，可以延長烤片時間和提高烤片溫度;

　　②用含有多聚賴氨酸的玻片，可以購買到或這自己做;

　　③有些組織本身就容易掉片，如骨組織等，操作時沖PBS不要直接沖到組織上，沖到組織上方，讓它流下沖洗組織;

　　④用高溫修復時，溫度驟冷也可能引起。

　　它的背景有哪些?

　　①考慮一抗濃度高;

　　②然后調整DAB孵育時間;

　　③也要考慮血清封閉時間是否過短;

　　④適當增加抗體孵育后的浸洗次數和延長浸洗時間等。

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