ELISA檢測結果不理想的原因
 

　　ELISA作為經典的免疫檢測方法，看起來很平常，然而真正做好它并不容易，古朵生物專注科研試劑盒的研發及銷售多年涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領域，滿足您實驗所需，以實現與客戶的雙贏，完善的庫存及供應體系以及高效穩定的專業技術，保證產品均能現貨供應。有哪些方法可以借鑒呢?

　　確定您的樣本類型和試劑盒可以兼容

　　常見樣本類型有血清，血漿，細胞培養上清，如果是廠家實驗驗證過的，可根據產品說明購買使用。

　　注意:血漿制備用到的抗凝劑有 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等多種，相應的血漿性質存在差異，需單獨確認兼容性

　　試劑盒檢測范圍需要匹配樣本中標志物濃度

　　elisa試劑盒的定量檢測范周需參考標準曲線，在標準曲線和最高濃度區間內屬于線性范用，其中的值是可信和可定量的。濃度高于線性范圍的樣品要稀釋到線性范圍內來測量，而濃度低于線性范圍的樣品，其測量值不能用于計算濃度只能用做參考。有一種常見的相關情況是:健康人樣本中很多標志物的濃度偏低，測量值低于標準曲線值.

　　二、樣本收集有講究

　　以血清為例，樣本收集可參考試劑盒說明書，但需注意以下要點。樣本盡量用無菌管收集，避免細菌的酶類和代謝產對結果的影響。采集過程要避免溶血，因為紅細胞溶解釋放的活性物質可能會影響檢測。保存過程中如有沉淀，應離心后取上清液。樣本若不立即測定，建議按照每次使用量分裝保存在 -20，每次檢測使用一管，即避免交叉污染和反復凍融有能保證檢測結果的平行可比性。

　　四、實驗前要準備好相應試劑

　　提前將所有試劑平衡到室溫環境，這個過程大致需半小時左右。洗液是濃縮液，如有結晶析出，需溶解后再進行稀釋。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液。為保證蛋白標準品溶液配制質量，蛋白標準品為凍干粉，重溶前需將管子離心，加入說明書的緩沖液，慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻，至少 15 分鐘，不建議用槍頭吹打。溶解后如需保存，按每次使用量分裝后根據說明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標準品時，建議用聚丙烯管(對蛋白吸附力很例每步都要充分混勻且更換新槍頭，確保梯度準確性。

　　五、儀器設備的準備

　　相關設備包括移液器、洗板機/搖床和酶標儀。移液器的準確性對于ELISA實驗結果的可靠性十分關鍵，需要確保定期校準維護。搖床的使用是為了讓反應體系快速達到平衡，獲得穩定、可重復的結果。不用搖床對實驗通常的影響是，OD值低，CV 大。酶標儀等設備使用前提前15分鐘開機預熱。

　　ELISA實驗 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。