ELISA酶聯免疫吸附實驗之競爭法測抗體

　　酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是將抗原抗體反應的特異性和酶的催化作用相結合而發展起來的一種免疫標記技術，既可用于組織、細胞內抗原的檢測，又可用于體 液中抗原抗體的檢測。根據檢測方法的不同，可將酶聯法分為雙抗體夾心法、間接法、競爭法、捕獲法和其他ELISA，今天就讓恒遠來為您講解ELISA酶聯免疫吸附實驗之競爭法。

　　競爭法

　　既可用于抗原半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以抗原競爭法為例，將已知抗體吸附于固相載體，加一定量已知酶標抗原及待測抗原，使兩者 競爭與固相抗體結合，經洗滌，zui后結合于固相抗體上的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關。步驟如下：

　　(1)已知抗體包被酶標板，4℃隔夜。

　　(2)測定管內加一定量酶標抗原和待檢樣品，對照管內只加相同量酶標抗原。溫育，洗滌。

　　(3)分別于測定管、對照管內加一定量底物顯色。

　　(4)用酶標儀測定對照管、測定管內OD值，用空白調零。通過對照管與測定管OD值之 差，計算標本中待測抗原含量。

　　進行ELISA操作時應注意以下幾點：

　　①實驗室溫度應控制在18℃～25℃;

　　②加樣須準確，同一樣本設立對照管、測定管各兩孔，取其平均值;

　　③嚴格控制溫 育反應溫度及時間，洗滌應充分;

　　④ 結果判定應以儀器為準，肉眼僅作參考。

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