古朵快訊：抗體滴定的方法與操作步驟

　　抗體滴定 (antibody titration)就是確定合適的抗體用量和抗體濃度，以實現陽性信號盡可能強，而陰性信號盡可能低即得到合適的S/N(信噪比值)。一般抗體供應商都會準薦抗體使用量，如Test包裝抗體，但為了達到很棒的實驗效果及節省抗體，我們則需要自己做滴定，尤其在多指標流式檢測實驗中，抗體滴定就更加重要了

　　具體的抗體滴定步驟如下:

　　以APC-CD49b (BioLegend Ca#108909) 抗體為例，濃度為0.2mg/ml，推薦抗體使用濃度為 s0.25ug/100ul。起始滴定濃度一般為推薦濃度的兩倍(即起始濃度為0.5ug/100ul) ，做8次2倍釋。假設用100ul體積，在首孔/管的97.5ul稀釋液里加入2.5ul抗體，然后從首孔管取出50ul加入第二孔/管的50ul稀釋液中，從第二孔管中取出50ul加入至第三孔管的50ul稀釋液，依次倍比得釋，最后，向每個孔中加入50u細胞，注意整個提作，抗體要充分混勻。

　　抗體滴定并不是以抗體量細胞數來表示的，滴定的是抗體濃度(如ug/ml)，其與細胞量在標記10萬和1000萬個細胞范圍內相關性不大。如果您準備用于標記1億個細胞，千萬不要將抗體用量也增加100倍，通常只需增加2 - 5倍即可，有時甚至不用增加用量，如果您經常標記1億個細胞(如分選細胞時)，做2 - 3個點的快速滴定是很有用的。同樣的道理，如果您只標記5萬個細胞，那么也千萬不要減少抗體用量。記住，與抗體用量相關的指標是濃度(抗體量染色體積)這意味著，如果你是100ul的體積下進行滴定抗體，而染色時使用1ml的體積，那么你就需要用10倍的抗體量，同樣的道理，如果您在200ul體積下進行滴定，而染色時使用50ul體積，那么您就需要用114的抗體量。

　　染色之后，一般確定SI(染色指數)或S/N(信噪比)高的濃度，但有時也需要考慮一下抗體用量

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