Elisa實驗——常見樣本—細胞

　　利用ELISA(酶聯免疫吸附測定)進行檢測的樣本類型包括常見的血液(血清、血漿)，組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結果。下面對常見細胞樣本處理方法整理，希望對您有所幫助。

　　細胞樣本根據目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養上清作為樣本。 需要注意的是： 因該類樣本干擾因素較多，如細胞狀態、細胞數量、ph、培養基鹽離子濃度、采樣時間等，所以可能存在檢測不到的情況。

　　目的物是分泌型，主要在胞外，即可選擇細胞培養上清作為樣本，細胞培養上清處理方法相對簡單，取細胞培養上清，1000 × g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測。

　　目的物主要存在于胞內，則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型。

　　細胞裂解液：

　　貼壁細胞需要先用消化，離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集);

　　將收集到的細胞用冷 PBS 洗3次;

　　物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞，再反復凍融)：

　　超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂;

　　反復凍融：將待破碎的細胞在-20℃以下冰凍，室溫融解，反復3次，使細胞溶脹破碎;

　　將標本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用。

　　注: 一般情況下，物理方法如反復凍融，勻漿等方法會比化學方法好，因為化學方法會引入酸或堿，可能會對ELISA實驗產生影響。利用化學的細胞裂解液裂解細胞，如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應影響檢測效果，推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。

　　樣本保存：

　　處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復凍融，樣本處理之后可分裝密封保存， 4 度保存應小于 1 周，-20 度不應超過 1 個月，-80度不應超過2個月。在標本使用前應緩慢均衡至室溫，不應加熱使之融解。

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