ELISA試劑盒又稱為酶聯免疫試劑盒

　　現在很多生物制藥廠和醫療實驗室常用的檢測設備，主要的試驗方法就是酶聯免疫吸附方法。ELISA試劑盒是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應結合起來的一種微量分析技術。酶標記抗原或抗體以后，既不影響抗原抗體反應的特異性，也不改變酶本身的活性。因為ELISA試劑盒價格低廉且準確性搞、反應時間短等優點，所以適合大批量的檢測，一般常常用于食品安全檢測方面。

　　ELISA試劑盒需要遵循的3個要點：

　　1.抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學活性;

　　2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性;

　　3.酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，ELISA試劑盒可根據已知濃度的抗原或抗體的顏色反應的深淺繪制標準曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

　　ELISA試劑盒實驗結果的準確性：

　　在ELISA試劑盒中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:(1) 固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、ELISA試劑盒試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯(聚苯乙烯磺酸鈉)凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

　　(2) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)ELISA試劑盒進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。

　　(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA試劑盒法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

　　(4) 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應注意防護。不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。ELISA試劑盒底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

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