人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）試劑盒（ELISA） 使用說明書 

? 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人 抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）的含量。 

? 有效期：6個月 

? 保存條件：2-8℃ 實驗原理 

       試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人抗酒石酸酸性 磷酸酶5b（TRACP-5b）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體， 經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作 用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）呈正 相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。 樣本處理及要求 

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 

2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000 ×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 

3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞 會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體 積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。 推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組 織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘， 取上清檢測。 

4. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置 于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 

注：標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。