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技術文章

免疫磁珠的應用

閱讀:1873發(fā)布時間:2011-5-20

目前有許多研究者應用免疫磁珠來分離細胞,具體有:

  1 用于純化巨核細胞及T細胞

  中國生物學家馬東初用GPⅡb/Ⅲa血小板單克隆抗體結合磁珠分離鑒定巨核細胞,可簡單、快速地從人骨髓中獲得高純度巨核細胞,巨核細胞純度達87.5%~97.1%,大約50%的這些巨核細胞具有生物活性,且磁珠分離的巨核細胞超微結構保持完整,可用于巨核細胞生物學和分子生物學方面的研究。生物學家戴碧濤等也用GPⅡb/Ⅲa(血小板膜糖蛋白)單克隆抗體分離和鑒定巨核細胞,經(jīng)涂片、染色和鏡下計數(shù)證實巨核細胞純度可達90%。該法分離的巨核細胞可作短期培養(yǎng)。與以往鑒定血液細胞的化學染色方法相比,免疫學方法具有特異性好、靈敏度高等優(yōu)點,可以提供更可靠的實驗依據(jù),在細胞分類、細胞膜上受體及基因表達產(chǎn)物等分子生物學的研究方面提供了方便,給再生障礙性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜以及巨核細胞有關疾病的發(fā)病機制及治療方面的研究提供了方便。國外生物專家Garlin nK等用抗CD3/抗CD28單克隆抗體包被的磁珠培養(yǎng)T細胞,結果表明該方法可獲得大量T細胞,為目前癌癥的細胞免疫療法提供了一個*的手段。

  2.用于檢測癌細胞和去除血液中癌細胞

  Makarovskiy等用免疫磁珠和RT-PCR(反轉錄-PCR)結合,檢測循環(huán)血液中前列腺癌細胞。以往單用RT-PCR有時出現(xiàn)假陽性或假陰性結果,采用免疫磁珠法初步富集后,再結合RT-PCR可在8ml血中檢測到少于10個的前列腺癌細胞。此外,Kongsard等采用免疫磁珠法除掉人類血液中癌細胞。在癌癥*中不采用自體輸血,因為存在再輸入腫瘤細胞的可能。該研究評價利用免疫磁珠從血液中去除癌細胞的效率,人的正常血液與兩個惡性細胞子(胸腺細胞PM1和MCF7)混合,血液經(jīng)過RC400TE白細胞膜,未經(jīng)過濾的樣品做對照。用IMB及克隆基因分析檢測惡性細胞,結果,經(jīng)過過濾的血液未發(fā)現(xiàn)有癌細胞。所以,作者認為使用白細胞過濾膜使得癌癥患者的自體輸血成為安全、可行的。

  3.用于凍存血樣中細胞的分離,仍可獲得很好的效果

  Sleasman[7]從冷凍保存的血樣中純化單核細胞和淋巴細胞,使用單克隆抗體和免疫磁珠分離冷凍血中單核細胞,從健康人群及HIV(免疫缺陷)人群獲得的血樣冷凍保存18個月后,復蘇細胞,用免疫磁珠將細胞分為CD14+單核細胞CD14+T細胞亞群,經(jīng)流式細胞計數(shù)儀(FACS)分析顯示,免疫磁珠提取率>95%再利用抗CD4單克隆抗體和匹配的免疫磁珠提取,富集到的CD4+T細胞,分為亞型CD4+CD45RO和CD4+CD45RA,提取率均大于90%,對冷凍樣品有效地復蘇說明,IMB法可目標性地選擇貯存樣品進行目的分析。

  此外,Sedgwick[8]比較了用不連續(xù)密度梯度方法和IMB方法,分離外周血中啫酸性細胞的效果。比較兩種方法分離所得到的細胞的生物學活性,磁珠法分離得到的細胞有明顯生物學活性,刺激LTC4產(chǎn)量,且表達特殊細胞表面標記物。在體外存活和粘附實驗中兩種方法無明顯差別。作者分析原因,可能是磁珠分離時中性白細胞的干預:相反,密度離心時啫酸性細胞暴露于葡聚糖離心液,可能影響下步細胞功能。困皮,在測試體外細胞功能時,應事先考慮不同方法分離后對細胞功能的影響。

 


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