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PCR產物的檢測PCR-ELISA法

閱讀：601發布時間：2011-10-24

PCR產物的檢測PCR-ELISA法

在一個引物的5’端標記上*以便使其能與包被板上的親合素結合而固定PCR產物，而在另一引物的5’端標記FITC，用HRP標記的抗FITC抗體與之結合顯色，即可進行常規ELISA檢測。如設立標準對照，此技術還可用于定量分析。

【試劑與配置】
包被液：4.3mmol/L Na2HPO4, 1.4mmol/L K2HPO4, 0.05% （w/v） Tween20, 40mmol/L NaCl, 2.7mmol/LKCl （pH7.2）
鏈霉親和素（13U/mg, Sigma）：用包被液配置為1μg/ml；
HRP標記的抗FITC抗體：用包被液稀釋至工作濃度
顯色液：1mg/ml的TMB（溶于DMSO），用50mmol/L乙酸鈉-檸檬酸（pH4.9）稀釋10倍；
終止液：2mol/L H2SO4
30%過氧化氫

【操作方法】
（1）在酶標板的每孔中加100μl鏈霉親和素，室溫包被過夜；
（2）室溫下，用包被液洗2次；
（3）1μl PCR產物用50μl包被液稀釋，加入孔中，室溫放置30min；
（4）包被液洗3～6次，每孔再加入50μl HRP-抗FITC抗體，室溫作用30min；
（5）包被液洗3～6次，加入30%過氧化氫3μl，顯色液80μl，室溫放置2～5min，觀察顏色變化；
（6）加入終止液終止反應，酶標儀上測OD450nm值。
PCR產物的檢測PCR-ELISA法
 


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