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組織樣本做ELISA時實驗如何減少實驗誤差

閱讀：443發布時間：2015-10-15

    經常會有來自學校客戶咨詢：用動物組織樣本做ELISA時實驗，如何確定排除檢測誤差?它與western blot定量哪個實驗結果更可靠？

我公司技術人員解析到：

一、定量檢測的話肯定是選ELISA。 Western blot只是一個半定量的實驗方法。

二、關于排除檢測誤差：1）實驗人員一定要選好合適的內參，比如可以測目標蛋白/總蛋白，則內參是總蛋白量，如果使用目標蛋白/總組織重量，則很不準確，因為抽提過程的效率不穩定，即每克組織能夠提取出來的蛋白量不固定，而且每個組織含水/含不相干的組織量也不同。建議可以參考相關文獻來選擇內參。2）zui普通的查驗誤差的辦法，每個試樣多測幾個孔。一般至少兩個，三個更好。確定每個孔讀數一致或非常相近，則知道結果比較可信。

組織樣本的處理原則：

1，稱取的組織重量不能低于50mg。

2，組織在勻漿器勻漿過程中，勻漿液應該分2次加進去，這樣勻漿更充分。

3，充分勻漿完成后離心取上清，離心機的轉數選取2000-3000轉每分，轉數不宜超過5000.離心時間為15-30分鐘。

4，勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS（PH=7.2-7.4） 


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