支原體感染會在你不經意時令培養細胞慢慢枯萎，因此對培養細胞定期進行支原體檢測非常重要。支原體感染不易察覺，只有在其擴散前找出被污染的培養物，才能及時避免更大的損失。上海科興就為你介紹了幾種細胞培養中檢測支原體的常用方法。
分離培養法生物通
分離培養法是支原體檢測的金標方法，其檢測度zui高。這種方法是從可疑的細胞培養體系中取樣，并接種到zui適宜支原體生長的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體，它們就會在這種瓊脂平板上*生長，zui終形成明顯可見的特征性菌落。分離培養法基本不會出現假陰性結果，因此被譽為支原體檢測金標準。不過分離培養法也存在兩個弊端，一是檢測時間太長，支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間。二是盡管可以檢測絕大多數支原體種類，分離培養法也有力所不及的時候。
如果你實在不想等這么久，或者希望在分離培養法的等待過程中先拿到初步結果，你可以試一試DNA、PCR或酶學檢測方法。不過需要注意的是，上述檢測方法都不能單獨檢出所有類型的支原體，而且靈敏度也沒有分離培養法高，所以結合使用兩種方法以獲得zui可靠的檢測結果。
DNA檢測
DNA檢測需要將可疑樣品與指示細胞共同培養，因此一般需要幾天時間。DNA檢測所用的指示細胞通常是細胞質區域較大的Vero細胞，如果原樣本中含有支原體，那么當細胞DNA被熒光染料（如Hoechst染料）染色時，就可以在指示細胞的核周圍觀察到熒光斑點或熒光顆粒。分離培養法用來檢測支原體M. hyorhinis菌株并不可靠，而DNA法可以準確的將其檢測出來。
PCR法
PCR法也可以檢測M. hyorhinis菌株，PCR法檢測支原體只需幾個小時，是zui快但也是zui不靈敏的支原體檢測方法。該方法采用針對支原體DNA的引物用PCR檢測可疑樣本，其中PCR引物通常針對支原體的16S rRNA基因。在凝膠電泳過程中，支原體DNA會顯示為特異性條帶，以此指示支原體的存在。PCR法可以檢測大多數支原體，但謹慎起見同時使用另一種檢測方法來進行驗證。酶學檢測和ELISA
此外，也還存在一些其他支原體檢測方法。例如酶學檢測是將可疑樣本添加到特定底物中，在這一體系內支原體的酶可以將ADP轉化為ATP，隨后能利用ATP發光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測，以ELISA法為基礎的支原體檢測一般使用針對支原體16S rRNA基因的帶標記探針或抗體，來檢測培養物中是否含有支原體。
定期檢測
支原體感染會使培養細胞慢慢枯萎，因此對培養細胞定期進行支原體檢測非常重要。一般來說每1至3個月就應該進行一次支原體檢測。將定期支原體檢測常規化堅持下去，是細胞培養實驗室應對支原體感染的關鍵。
上海科興長期經營“ELISA試劑盒”等elisa試劑盒及生物試劑、酶、細胞等生物化學試劑。各類產品齊全，價格實惠，質量有保證，并且可以提供免費代測，請您放心選購，咨詢！
