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閱讀:415發(fā)布時(shí)間:2014-12-11
植物組織蛋白質(zhì)提取方中三氯醋酸—丙酮沉淀法:
1、在液氮中研磨葉片
2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過(guò)夜,然后離心(4℃8000rpm以上1小時(shí))棄上清。
3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1小時(shí)),然后真空干燥沉淀,備用。
4、上樣前加入裂解液,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以沒(méi)有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)),可臨時(shí)保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩?/span>
三氯醋酸—丙酮沉淀法主要針對(duì)雙向電泳,雜質(zhì)少,離子濃度小的特點(diǎn),當(dāng)然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會(huì)減少。
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