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人血管生長(zhǎng)素ELISA試劑盒雙抗體夾心法

閱讀:393發(fā)布時(shí)間:2015-1-22

   檢測(cè)人血管生長(zhǎng)素ELISA試劑盒時(shí)的操作方法有雙抗體夾心法和間接法,這次著重了解雙抗體夾心發(fā)的操作過(guò)程。

   人血管生長(zhǎng)素ELISA試劑盒雙抗體夾心法:

   1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為110μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml4 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。

   2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

   3.加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml37 孵育0.51小時(shí),洗滌。

   4.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml37 1030分鐘。

   5.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

   6.結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。



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