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內源性過氧化物酶阻斷劑的使用范圍

2025-4-7  閱讀(88)

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 內源性過氧化物酶阻斷劑是用于免疫組織化學(IHC)實驗中的一種試劑,主要用于阻斷組織樣本中內源性過氧化物酶的活性,以避免其在后續染色步驟中產生非特異性信號,影響實驗結果。

作用機制

內源性過氧化物酶(如辣根過氧化物酶,HRP)在某些組織(如紅細胞、白細胞、肝臟和腎臟)中天然存在。在IHC實驗中,使用HRP標記的二抗進行顯色反應時,這些內源性酶會與底物反應,導致背景染色增強,干擾目標蛋白的特異性檢測。阻斷劑通過抑制內源性過氧化物酶的活性,減少非特異性信號。

常用阻斷劑

過氧化氫(H?O?):

常用濃度為0.3%-3%,溶于甲醇或水。

通過氧化作用抑制內源性過氧化物酶活性。

處理時間通常為10-30分鐘。

疊氮鈉(NaN?):

常用濃度為0.1%-1%

通過抑制酶活性來阻斷內源性過氧化物酶。

處理時間通常為10-30分鐘。

甲醇-H?O?溶液:

甲醇與H?O?混合,常用比例為0.3% H?O?溶于甲醇。

同時阻斷內源性過氧化物酶和部分內源性生物素。

使用步驟

組織切片脫蠟、水化。

用阻斷劑(如3% H?O?)孵育10-30分鐘。

用緩沖液(如PBS)清洗切片,去除殘留阻斷劑。

進行后續IHC染色步驟。

注意事項

濃度與時間:阻斷劑濃度過高或時間過長可能破壞組織抗原。

組織類型:不同組織內源性過氧化物酶含量不同,需優化條件。

試劑選擇:根據實驗需求選擇合適的阻斷劑。

 

 


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