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ELISA實(shí)驗(yàn)操作中洗滌這一步其實(shí)是非常重要的，上海信帆告訴你洗滌程序和注意事項(xiàng)：
洗滌是ELISA不同于均相免疫學(xué)檢測技術(shù)的一大特征，洗滌在整個ELISA反應(yīng)過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，卻非常關(guān)鍵。其目的是去除反應(yīng)體系中與反應(yīng)無關(guān)的成分，包括未結(jié)合的酶結(jié)合物以及反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。洗滌液通常為含有一定濃度Tween 20 的緩沖液，Tween 20 是一種非離子去垢劑，既含親水基團(tuán)，又含疏水基團(tuán)，在洗滌中的作用機(jī)制是借助其疏水基團(tuán)與經(jīng)疏水性相互作用被動吸附于聚苯乙烯固相上蛋白分子的疏水基團(tuán)形成疏水鍵，從而削弱蛋白分子與固相的吸附。同時在其親水基團(tuán)與液相中水分子的結(jié)合作用下，促進(jìn)蛋白質(zhì)分子脫離固相而進(jìn)入液相，zui終被洗脫。
必須注意非離子去垢劑的使用濃度，zui常用的洗滌液是含0.05 %Tween20，pH為中性的磷酸鹽緩沖液，如果洗滌液中的Tween20 超過0.2% ，可使包被于固相上的抗原抗體解吸附而影響實(shí)驗(yàn)的測定下限。洗滌可采用洗板機(jī)或手工洗滌兩種方式，手工洗板則分為浸泡式和流水沖洗式洗滌。無論洗板方式如何，在向板內(nèi)注液時應(yīng)當(dāng)避免氣泡殘留孔內(nèi)，否則會因洗滌液難以進(jìn)入孔中而影響洗滌效果。在采用洗板機(jī)洗板時，要保證洗板機(jī)上的每個吸液針都能一致地插入板孔底部將洗液*吸凈，要求洗板后殘液小于2 μL，即人工扣板墊紙不濕，浸泡時間超過45 s。
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