ELISA抗原競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)樣品中sIL-2R含量 【基本原理】 本法是用純化或重組的IL-2R（α鏈，P55，CD25，Tac抗原）蛋白包被96孔酶標(biāo)反應(yīng)板，同時(shí)加入已知量的抗IL-2RMcAb，再分別加入sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣品。則待測(cè)sIL-2R或者sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品與包被的純化或重組的IL-2R蛋白競(jìng)爭(zhēng)與抗IL-2R McAb結(jié)合。通過與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，從抗IL-2R McAb與包被的純化或重組的IL-2R蛋白結(jié)合受抑制程度來求得待測(cè)樣品中sIL-2R含量。 【材料和試劑】 （1） 純化或重組的IL-2R蛋白（α鏈，P55，CD25，Tac抗原）（40.000u/ml） （2） FITC標(biāo)記的抗IL-2R McAb（0.2μg/ml）：FITC為異硫氰酸熒光素，這里僅作為半抗原使用，而不作為熒光素標(biāo)記。 （3） 堿性磷酸酶標(biāo)記的兔抗FITC抗體（酶標(biāo)抗體） （4） 對(duì)硝基苯磷酶鹽底物液；用pH9.8的二乙醇胺緩沖液溶解，配成濃度為1mg/ml。 （5） 1%牛血清白蛋白-PBS（1%BSA-PBS）：為封閉液點(diǎn)稀釋液 （6） 不同倍比稀釋度的sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品：以1% BSA-PBS稀釋。 （7） 洗滌液（0.05%Tween20-PBS） （8） 待測(cè)sIL-2R樣品 （9） 96孔酶標(biāo)板（聚苯乙烯板），酶標(biāo)儀，波長(zhǎng)465nm濾光片 （10） 刻度吸管，毛細(xì)吸管，加樣器（頭），4℃冰箱 【操作步驟】 （1） 以一定濃度的純化或重組的IL-2R（P55）蛋白包被96孔酶標(biāo)板，100ul/孔，4℃過夜（16-72h）； （2） 棄包被液，用1%BSA-PBS封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，200ul/孔，置室溫2h； （3） 用洗滌液加滿各孔置3min，然后傾去，反復(fù)洗滌3次； （4） 分別加入不同稀釋度的sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品及待測(cè)樣品，50μl/孔； （5） 各孔均加入FITC標(biāo)記的IL-2R McAb，50μl/孔，充分混勻后置室溫2h； （6） 同上洗滌3次； （7） 各孔均加入堿性磷酶酶標(biāo)記的兔抗FITC抗體，100μl/孔，置室溫1h； （8） 同上洗滌3次； （9） 各孔均加入底物液，100μl/孔，置室溫15-30min； （10） 用酶標(biāo)儀以波長(zhǎng)405nm測(cè)各孔OD值。 【結(jié)果分析】 （1） 以sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品各稀釋度對(duì)應(yīng)的濃度值為橫座標(biāo)（X），相應(yīng)的OD值為縱座標(biāo)（Y），在普通座標(biāo)紙上繪制競(jìng)爭(zhēng)抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線，OD值隨標(biāo)準(zhǔn)品sIL-2R濃度升高而降低。 （2） 根據(jù)待測(cè)樣品所測(cè)得的OD值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品sIL-2R含量。 （3） 本方法測(cè)定sIL-2R含量時(shí)，不需要計(jì)算抑制百分率。 酶免試劑盒（ELISA KIT）
自身免疫系列酶聯(lián)免疫試劑（ELISA）：抗核抗體（ANA） ，抗中心粒胞漿抗體，雙鏈DNA， ENA抗體，ENA-Profile抗體，Sm/RNP抗體，Sm抗體，Jo-1抗體，Scl-70抗體，SS-A抗體， SS-B抗體，抗甲狀腺球蛋白抗體（TG-Ab），抗心磷脂抗體IgG（ACA IgG），抗心磷脂抗體IgA（ACA IgA），抗心磷脂抗體IgM（ACA IgM），髓過氧化物酶，蛋白酶3，抗甲狀腺過氧化物酶（TPO），?2糖蛋白，抗麥膠蛋白IgG，抗麥膠蛋白IgA，類風(fēng)濕因子 IgM | 
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