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使用夾心法ELISA檢測白介素6的實驗方法下載
閱讀：1429 發(fā)布時間：2014-2-20使用夾心法ELISA檢測白介素6的實驗方法下載
試劑器材
1、試劑盒提供包被抗體、酶標抗體、標準品，底物(ABTS)、96孔elisa板。
2、包被緩沖液、PBS、底物緩沖液配制同常規(guī)ELISA法。
操作步驟：
1. 包被：pH9.5 碳酸鹽緩液稀釋4D7單克隆抗體粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔，放4℃,36小時。
2. 封閉：0.1%吐溫PBS(Buffer A)沖洗96孔板三次，加3%BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃,1小時。
3. 加待檢樣品：Buffer A 沖洗96孔板三次，加待檢樣品及Buffer B 稀釋的標準品100μl/孔，放37℃,3小時。
4. 加酶標抗體：Buffer A沖洗96孔板五次,3%PEG Buffer A稀釋酶標抗體至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃,1小時。
5. 顯色：Buffer A沖洗96孔板五次，pH5.4檸檬酸緩沖液溶解底物(ABTS),0.2mg/ml,加3%H2O2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室溫下或37℃顯色。
注意！
1. 待檢標本如為血清，應采用一次性容器，血液采集后盡快(6小時以內)分離血清。
2. 封閉液或抗體稀釋液應新鮮配制或凍存。