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    為了得到更好的實驗結果，一些ELISA實驗新手們還需多加了解技術內容，上海恒遠生物公司每周都會為您精心整理出重點技術要領，能夠熟練的掌握好這些之后再應用到實驗里面就會簡單的多。下面來看看今天的重點內容：ELISA實驗技術點。
    
樣本加樣方法
1、細胞上清：前處理必須是細胞離心去除，每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時，用標準品稀釋液直接稀釋。
2、腦脊液：前處理必須是細胞離心去除，每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時，用標準品稀釋液直接稀釋。
3、血清血漿：請加入50 ul樣本分析緩沖液后加50 ul標本,如稀釋量大，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
A.血清標本應是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
B.血漿標本，推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測，標本收集后請分裝，凍存于－20℃，避免反復凍融。
C.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑；
D.標本應清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。
E.請勿使用溶血，高血脂或污染的標本檢測，否則結果將不準確。
4、組織勻漿液的樣本，要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白成份被內源性蛋白酶降解，造成檢測結果的值偏低。
    因組織勻漿液的樣本蛋白種類多，含量豐富，實驗參照血清血漿標本的處理方法進行，否則就會影響實驗結果。具體是加入50 ul樣本分析緩沖液后加50 ul標本，需稀釋時，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
    因為目標蛋白不同，可能造成降解的蛋白類型可能不一樣，如果實驗前通過文獻確定用哪種蛋白酶抑制劑，有針對性加入，可節省抑制劑。如果查不到相關文獻，可采用組合抑制的辦法確保蛋白不易被降解。
             
檢測范圍及靈敏度相關問題
1、不同廠家的試劑盒的檢測范圍并不相同，一般說來，診斷試劑的檢測范圍以ng/ml計。而常見的科研試劑盒中的樣本中的目標蛋白，范圍可隨樣本的類型而變化。所以實驗前應通過文獻和預實驗的方法確定樣本是否在所購試劑盒的范圍內，如果不在檢測范圍內，分兩種情況對待。
A.如果樣本中目標蛋白太低，需找相應靈敏度更高的試劑盒來檢測或濃縮樣本；
B.如果樣本中目標蛋白太高，則需要進一步稀釋后進行檢測
2、靈敏度的問題
    一般說來，如果待測樣本中目標蛋白的濃度比較高，則對靈敏度要求相對小一些。如果待測樣本中目標蛋白的濃度比較低，則必須考慮靈敏度的問題。一般來說，試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準確的，低于這個值因為與曲線是個“S”型結構有關，所以結果是有偏差的，是一種估算。再加上實驗誤差，所以達不到理想的效果。建議選擇試劑盒時，應該看曲線上zui小的濃度值，而不是試劑盒上寫的靈敏度。
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