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技術文章

人生長分化因子-15檢測Elisa試劑盒科研使用

閱讀:310發布時間:2014-5-12

人生長分化因子-15檢測Elisa試劑盒操作步驟

  • 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

80ng/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

40ng/L

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

20ng/L

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

10ng/L

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

5ng/L

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

  • 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻
  • 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
  • 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  • 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
  • 溫育:操作同3。
  • 洗滌:操作同5。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)

測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

人生長分化因子-15檢測Elisa試劑盒實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人生長分化因子-15(GDF-15)水平。用純化的人生長分化因子-15(GDF-15)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入生長分化因子-15(GDF-15),再與HRP標記的生長分化因子-15(GDF-15)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的生長分化因子-15(GDF-15)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人生長分化因子-15(GDF-15)濃度

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