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豬致病性大腸桿菌(EPEC)Elisa試劑盒技術(shù)說明

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豬致病性大腸桿菌(EPEC)Elisa試劑盒操作步驟
1.
編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1
孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.
加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不
觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.
溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.
配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5 次,拍干。
6.
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
7.
溫育:操作同 3。
8.
洗滌:操作同 5。
9.
顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

豬致病性大腸桿菌(EPEC)Elisa試劑盒計(jì)算和結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為致病性大腸桿菌(EPEC)陰性
陽(yáng)性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為致病性大腸桿菌(EPEC)陽(yáng)性


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