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人β干擾素(IFN-β)Elisa試劑盒技術分析

閱讀:119發布時間:2014-10-24

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人β干擾素(IFN-β)Elisa試劑盒操作步驟
1.
標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
32pg/ml
5 號標準品
150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
16pg/ml
4 號標準品
150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
8pg/ml
3 號標準品
150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
4pg/ml
2 號標準品
150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2pg/ml
1 號標準品
150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2.
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.
溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.
配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復 5 次,拍干。
6.
加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7.
溫育:操作同 3。
8.
洗滌:操作同 5。
9.
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。

人β干擾素(IFN-β)Elisa試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人 β 干擾素(IFN-β)水平。用純化的人 β 干擾素
(IFN-β)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入 β 干擾素(IFN-β),
再與 HRP 標記的 β 干擾素(IFN-β)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗
滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的 β 干擾素(IFN-β)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定
吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人 β 干擾素(IFN-β)濃度

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