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2016年06月03日 11:22上海邦景實業(yè)有限公司點擊量：1732
western blot的作用
免疫印跡是一個用于蛋白質(zhì)分析的常規(guī)技術，在電場的作用下將電泳分離的蛋白從凝膠轉移至一種固相支持物，然后利用抗原—抗體的特異性反應，從蛋白混合物中檢測出目標蛋白，從而定量或定性地確定正常或實驗條件下細胞或組織中目標蛋白的表達情況。Western blot還可用于蛋白—蛋白、蛋白—DNA和蛋白—RNA相互作用的后續(xù)分析，作為一種廉價、便捷、可靠的研究工具，將與質(zhì)譜和蛋白質(zhì)芯片等技術一起在蛋白質(zhì)組時代發(fā)揮重要作用。ELISA試劑盒
Western bloting的注意事項
1、為了讓實驗更加嚴謹有說服力都要設計對照實驗，對照分為：陽性對照（有標準品（比如β-actin，GAPDH）或陽性血清）；陰性對照（測血時用相應小鼠未免疫血清（即正常血）；空白對照（不加一抗，用PBS代替）；無關對照（用無關抗體）
2、一抗、二抗的濃度一般要參照抗體說明書選擇zui適當?shù)谋壤豢苟沟倪x擇直接影響實驗結果以及背景
3、實驗設計時所釆用的抗原批次要一樣，盡量的避免人為的帶來個體差異。特別在做裂解液時更要注意所釆用的操作條件，盡可能的排除可變因素給實驗帶來不確定性。
4、凝膠的質(zhì)量直接影響以后的實驗結果，要特別注意幾點：凝膠要均一沒有氣泡；積層膠與分離膠界面要水平；AP和TEMED的量不能過多，太多會導致膠易脆裂；拔梳子時要快，盡量保證點樣孔平整。
5、電泳、轉膜時特別要注意正負極，電壓電流都不能過高；轉膜時“三明治”的疊放次序不錯，同時要防止產(chǎn)生氣泡；盡量讓電轉溫度保持在10度以下，冰浴為宜。
6、封閉時一般在室溫下2h就夠了，但是要注意如果是*標記的二抗就不宜用牛奶，因為牛奶中含有*，用BSA效果更好。
7、加一抗二抗要嚴格保證反應時間，洗膜要注意盡可能地將一抗二抗洗凈，有利于降低背景；
EMR2 CD312抗體
eIF4EBP1 eIF4E結合蛋白抗體
Phospho-EGFR (Ser1045) 磷酸化表皮生長因子受體抗體
Phospho-EGFR (Tyr1138) 磷酸化表皮生長因子受體抗體
Ephrin A1 Receptor 肝配蛋白A1受體抗體
eIF2C2 真核翻譯起始因子2C2抗體
EYA2 眼睛發(fā)育缺失蛋白EYA2抗體
EYA4 EYA4蛋白抗體
ELK4 血清反應因子輔助蛋白1抗體
ELMO2 吞噬細胞運動蛋白2抗體
EPB41 紅細胞膜條帶4.1蛋白抗體
phospho-EPO Receptor (Tyr485) 磷酸化紅細胞生成素受體抗體
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