企業(yè)新聞 品牌專欄 案例報(bào)道 企業(yè)文化 技術(shù)文章 產(chǎn)品評(píng)測(cè)
2019年10月10日 09:00上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司點(diǎn)擊量：472
免疫熒光技術(shù)有兩種檢測(cè)方法：用熒光標(biāo)記抗體示蹤或檢測(cè)相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光標(biāo)記抗原示蹤或檢測(cè)相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法。其中以熒光抗體方法較常用。
1.在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)研究前，有哪些因素需要考慮？
答：1.根據(jù)抗原選擇合適的抗體：確認(rèn)抗原可以識(shí)別哪一種異構(gòu)體以及抗原表位的位置。
2. 確認(rèn)您的目的蛋白在該樣本中是否表達(dá)（這里需要用到陽(yáng)性對(duì)照）。
3. 根據(jù)您所要研究的目標(biāo)蛋白來(lái)確定合適的樣本類型（石蠟切片、冰凍切片還是細(xì)胞制備物等）。
4.選擇抗體時(shí)需要考慮該抗體的物種交叉反應(yīng)；
5. 關(guān)于蛋白，您需要考慮它的組織定位和細(xì)胞定位，以及染色時(shí)是否應(yīng)該有信號(hào)。
6.選擇合適的固定方法及抗原修復(fù)方法。
7.抗體的工作濃度或稀釋比例，以及抗體的物種來(lái)源也是需要考慮的重要因素。
2.免疫組化實(shí)驗(yàn)里為什么要對(duì)樣品進(jìn)行處理？
答：樣品處理是為了調(diào)控樣本中蛋白的表達(dá)水平。
如果是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，我們可能需要使用適當(dāng)?shù)囊种苿┗蚣せ顒﹣?lái)上調(diào)或下調(diào)細(xì)胞中某種蛋白質(zhì)的表達(dá)。如果是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，我們需要考慮更多的因素，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)對(duì)象是活的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。在選擇抑制劑或激活劑、激動(dòng)劑或拮抗劑時(shí)，應(yīng)盡量避免由于非特異性結(jié)合其它蛋白所導(dǎo)致的非特異性效應(yīng)。
對(duì)于某些特殊試驗(yàn)樣品，比如腦，我們需要確保細(xì)胞的滲透性，讓化合物能真正進(jìn)入細(xì)胞或血腦屏障。另外需要確保所使用的化學(xué)品能夠溶于合適的溶劑。還有確定*適合的給藥途徑（注射或口服）。完成上述所有步驟之后，您就可以獲取組織或細(xì)胞樣品了。
3.請(qǐng)問(wèn)如何根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)對(duì)象來(lái)選擇不同的樣本形式呢？
答：對(duì)于細(xì)胞制備物，它們常見(jiàn)的形式是涂片或培養(yǎng)的細(xì)胞系。對(duì)于組織樣本，*常用的是石蠟包埋的組織切片，福爾馬林固定。原因是它們能夠保持組織形態(tài)與蛋白抗原性之間的*佳平衡。石蠟包埋的組織切片很穩(wěn)定，并且易于使用。但它的不足之處是很耗時(shí)（需要對(duì)切片進(jìn)行脫蠟處理和抗原修復(fù)）。一般來(lái)說(shuō)，石蠟切片適用于 4 微米厚的切片。如果切片厚度大于4微米，抗體可能會(huì)被困住，導(dǎo)致假陽(yáng)性染色，這是我們需要避免的。
另一種常見(jiàn)的樣本形式是冰凍組織切片（IHC-FR），這對(duì)于不能經(jīng)受醛固定處理和石蠟處理的抗原來(lái)說(shuō)非常理想。因此這些抗原將呈現(xiàn)出更天然的狀態(tài)。但冰凍切片的缺點(diǎn)是組織形態(tài)可能不佳，與石蠟切片相比，冰凍切片可能沒(méi)那么好看。冷凍切片通常也僅適用于厚度為 4 到 10 微米的薄切片，超過(guò)這個(gè)厚度的切片可能會(huì)困住抗原，導(dǎo)致假陽(yáng)性染色結(jié)果。
如果您所要研究的組織類型無(wú)法做成這種厚度的薄切片，可以考慮采用漂片。該技術(shù)一般用于腦組織和脊髓，在發(fā)育研究中，這是一項(xiàng)非常有用的技術(shù)。該技術(shù)可用于厚度達(dá) 40 微米的更大切片。它的缺點(diǎn)是操作起來(lái)更加不便，整個(gè)過(guò)程中組織樣品都處于自由漂浮狀態(tài)，*后還必須將它們固定在載玻片上進(jìn)行觀察，操作有一定的難度。它的另一個(gè)缺點(diǎn)就是非常耗時(shí)，尤其是應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)研究時(shí)，動(dòng)物用 BFA 灌注，這顯然也是有難度的一步。
本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來(lái)源（非智慧城市網(wǎng)www.zvwid.cn）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
免費(fèi)注冊(cè)后，你可以
了解安防行業(yè)更多資訊查看安防行業(yè)供求信息凸顯安防行業(yè)自身價(jià)值 馬上注冊(cè)會(huì)員想快速被買家找到嗎
只需要發(fā)布一條商機(jī)，被買家找到的機(jī)會(huì)高達(dá)90%！還等什么？ 馬上發(fā)布信息
完善空氣監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)，提升在線監(jiān)測(cè)水平
湖南衡陽(yáng)人臉識(shí)別門禁廠家、人行通道擺閘/
應(yīng)急救援激光位移監(jiān)測(cè)儀：物體移動(dòng)即可發(fā)出
地方工信快報(bào)來(lái)了｜山東、內(nèi)蒙古、四川....
智慧城市一周熱點(diǎn)回顧｜2025中國(guó)產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)移發(fā)
交通領(lǐng)域動(dòng)態(tài)速覽｜工信部整頓隱藏式車門把
地方工信快報(bào)來(lái)了｜廣東、天津、北京......
智慧城市網(wǎng)2025年勞動(dòng)節(jié)放假通知
地方工信快報(bào)來(lái)了｜內(nèi)蒙古、廣西、浙江....
智慧城市一周熱點(diǎn)回顧｜《醫(yī)藥工業(yè)數(shù)智化轉(zhuǎn)
2025深圳國(guó)際智能安防展覽會(huì)-ISE安博會(huì)
2025深圳國(guó)際智能安防展覽會(huì)簡(jiǎn)稱“ISE安博會(huì)”。伴隨著智能【詳細(xì)】
微信公眾號(hào)
關(guān)于我們 企業(yè)建站 本站服務(wù) 會(huì)員服務(wù) 旗下網(wǎng)站 友情鏈接 興旺通
服務(wù)咨詢 網(wǎng)站客服 展會(huì)合作 媒體合作 采購(gòu)咨詢 友情鏈接
Copyright afzhan.com All Rights Reserved 法律顧問(wèn)：浙江天冊(cè)律師事務(wù)所 賈熙明律師 ICP備案號(hào)：浙B2-20100369
